結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

貨號：BC3295

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：30mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前加入5mL試劑一充分混勻備用；

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一充分混勻備用；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入500μL雙蒸水，充分溶解備用；

試劑七：液體250μL×2支，-20℃保存；

試劑八：液體12.5μL×2支；每支臨用前加入溶解好的4mL試劑四。

反應液Ⅰ的配制：臨用前在試劑二中加入14mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后將其加入試劑三混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。

產(chǎn)品說明：

   GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長反應，主要負責直鏈淀粉的合成。

   GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時生成ADP；進一步通過反應體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應生成的ADP數(shù)量呈正比，通過340nm下測定NADPH的增加量，可以計算GBSS活性。

需自備的的儀器和用品：

   紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液制備

   稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測。

二、測定步驟

   1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長340nm，蒸餾水調(diào)零。

   2、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻后立即轉(zhuǎn)移200μL微量石英比色皿或96孔板中， 340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

三、GBSS活性計算

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白濃度計算：

   單位的定義：每mg組織蛋白在1mL反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

   GBSS活性（U/mg prot）= [ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在1mL反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測×10⁹]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。

V測：測量體積，0.26m L；V樣：加入樣本體積，0.1m L；V反總：反應體積，0.31mL；V上清：加入上清液體積，0.15mL；V提取：加入提取液體積，1×10^-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

b.使用96孔板測定的計算公式如下：

1、按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。

V測：測量體積，0.26m L；V樣：加入樣本體積，0.1m L；V反總：反應體積，0.31mL；V上清：加入上清液體積，0.15mL；V提取：加入提取液體積，1×10^-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。
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3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。
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運輸說明：

極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。