二胺氧化酶測(cè)試盒 微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：BC1285

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 0.25mL×1 支，4℃保存。

試劑二：液體 2mL×1 管，4℃保存。

試劑三：液體 1mL×1 管，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

    DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度。

    DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過(guò)氧化氫，外源添加過(guò)量的辣根過(guò)氧化物酶，催化過(guò)氧化氫氧化鄰

聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺，在460nm處有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定該波長(zhǎng)吸光度增加速率，計(jì)算DAO活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

    天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

二、測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)460nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

三、酶活性計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

     酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 18×A 460 ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：

    酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

     DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 18×A 460 ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

     酶活性定義： 在pH7.2，溫度為37℃條件下，每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H²O²所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 18×A₄₆₀ ÷細(xì)胞數(shù)量

 (4) 按液體體積計(jì)算

     酶活性定義： 在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 18×A₄₆₀

    ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：

    樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

    酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

    DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 36×A 460 ÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：

     酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO 活性（nmol/min/g）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 36×A₄₆₀÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

      酶活性定義： 在pH7.2，溫度為37℃條件下，每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO 活性（nmol/min/10⁴cell）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T   = 36×A₄₆₀÷細(xì)胞數(shù)量

(4) 按液體體積計(jì)算

     酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H₂O₂所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

    DAO 活性（nmol/min/mL）=A₄₆₀÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 36×A₄₆₀

    ε ：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：

    反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

注意事項(xiàng)：

 1、如果OD值小于0.01，適當(dāng)加大提取用樣本量；OD值大于0.8，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量。

    2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

二胺氧化酶測(cè)試盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。