土壤中性磷酸酶（S-NP）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0460
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入50mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存8周；

2. 試劑四：臨用前取1支加入576μL無水乙醇（自備），24μL蒸餾水充分溶解。試劑變褐色后不能再使用，2-8℃可保存2周；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：0.5μmol/mL苯*標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響，根據(jù)最適pH范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。

中性環(huán)境中，S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯*和磷酸*鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-NP活性。

注意：實(shí)驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、臺式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水、乙醇、30~50目篩和甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比可以例參考文獻(xiàn)）
1. 新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
2．稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入0.05mL甲苯（自備），輕搖15min；然后再加入0.4mL試劑一并且充分搖勻，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應(yīng)24h；到時后取出并迅速加入1mL試劑二，充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。10000rpm，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到660nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL試劑一，200μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加730μL蒸餾水，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，200μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加730μL蒸餾水，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

注：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定1-2次。

1. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入50μL上清液，200μL試劑三，20μL試劑四，充分混勻，顯色后再加730μL蒸餾水，混勻后室溫靜置30min，于660nm測定吸光度，記為A測定管。

三、S-NP活性計算
活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個酶活單位。
S-NP活性（U/g 土樣）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)] ×1000×V總÷W÷T
=725×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；V總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，24h=1d；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
注意事項：
測定期間請將樣本在冰上放置，以免酶變性或失活。
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