羥*氨酸（HYP）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC0250
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：自備6 mol/L鹽酸溶液，大約需要100mL，常溫保存；試劑盒內(nèi)提供一個(gè)30mL棕色空瓶，僅做分裝使用，請(qǐng)自行標(biāo)注試劑名稱

2. 6 mol/L鹽酸提取液的配制：按濃鹽酸（37%）和H₂O的體積比是1：1進(jìn)行配制。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：0.5 mg/mL羥*氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。

產(chǎn)品說(shuō)明：
HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
樣本經(jīng)酸水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對(duì)二甲***甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過(guò)測(cè)定樣本水解液560nm吸光值，可計(jì)算HYP含量。
技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.051 μg/mL
線性范圍：0.117-15 μg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

“具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項(xiàng)：

1. 如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

2. 試劑有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。

3. 按樣本蛋白濃度計(jì)算時(shí)，需單獨(dú)提取樣本中的蛋白質(zhì)并測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.2g小鼠皮膚進(jìn)行樣本處理，取上清后蒸餾水稀釋32倍后按測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.548-0.124=0.424，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計(jì)算x=6.62，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：
組織羥*氨酸含量（µg/g 質(zhì)量）=4x÷W×32（稀釋倍數(shù)）=4×6.62÷0.2×32=4236.8 µg/g 質(zhì)量。
取8×10⁶個(gè)HMC-1細(xì)胞進(jìn)行樣本處理，取上清后按測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.245-0.124=0.121，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計(jì)算x=1.84，按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算含量得：
細(xì)胞羥*氨酸含量（µg/10⁶ cell）=2x÷N=2×1.84÷8=0.46 µg/10⁶ cell。
取300μL牛血清進(jìn)行樣本處理，取上清后按測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.243-0.124=0.119，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0634x+0.0044，R²=0.9996，計(jì)算x=1.81，按液體體積計(jì)算含量得：
液體羥*氨酸含量（µg/mL）=6.67×x=6.67×1.81=12.07 µg/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Litong Fan,Jiaqing Chen,Yanmeng Tao,et al. Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin. Journal of Orthopaedic Research. January 2019;(IF3.043).

2. Qu P, Rom O, Li K, Jia L, Gao X, Liu Z, Ding S, Zhao M, Wang H, Chen S, Xiong X, Zhao Y, Xue C, Zhao Y, Chu C, Wen B, Finney AC, Zheng Z, Cao W, Zhao J, Bai L, Zhao S, Sun D, Zeng R, Lin J, Liu W, Zheng L, Zhang J, Liu E, Chen YE. DT-109 ameliorates nonalcoholic steatohepatitis in nonhuman primates. Cell Metab. 2023 May 2;35(5):742-757.e10. doi: 10.1016/j.cmet.2023.03.013. Epub 2023 Apr 10. PMID: 37040763.

3. Hao Y, Zhou J, Tan J, Xiang F, Qin Z, Yao J, Li G, Yang M, Zeng L, Zeng W, Zhu C. Preclinical evaluation of the safety and effectiveness of a new bioartificial cornea. Bioact Mater. 2023 Aug 8;29:265-278. doi: 10.1016/j.bioactmat.2023.07.005. PMID: 37600931; PMCID: PMC10432718.

參考文獻(xiàn)：

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2. Ignat’eva N, Danilov N, Averkiev S. et al. Determination of hydroxyproline in tissues and the evaluation of the collagen content of the tissues[J]. Journal of Analytical Chemistry, 2007, 62: 51-57.

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