血清總鐵結(jié)合能力（TIBC）檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC2860
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑四：臨用前根據(jù)用量將A液和B液按1:1混合，當(dāng)天用完；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加0.9mL蒸餾水溶解，得到40μmol/mLFeSO₄溶液，2-8℃可保存8周。

產(chǎn)品說明：
血清總鐵結(jié)合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵的能力，其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。
Fe²⁺與菲洛嗪反應(yīng)形成紫紅色化合物，在562nm處有特征吸收峰。堿性條件下，血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可以與Fe³⁺結(jié)合，可以被還原成Fe²⁺，此時(shí)吸光度A1與未結(jié)合Fe³⁺數(shù)量正相關(guān)；酸化后，轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的Fe³⁺釋放，并且進(jìn)一步被還原成Fe²⁺，此時(shí)吸光度A2與總Fe³⁺數(shù)量正相關(guān)。A2減A1與TIBC呈正比。


技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：第一次測(cè)量的檢出限為0.0002 μmol/mL；第二次測(cè)量的檢出限為0.0017 μmol/mL。
線性范圍：第一次測(cè)量的線性范圍為0.00195-0.5 μmol/mL；第二次測(cè)量的線性范圍為0.00195-0.5 μmol/mL。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、EP管、蒸餾水。
操作步驟：

• 測(cè)定步驟（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取10μL 40μmol/mLFeSO₄標(biāo)準(zhǔn)液，加入1590μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
2、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至562nm，蒸餾水調(diào)零。
3、試劑一37℃預(yù)熱10min。
4、樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）

二、血清總鐵結(jié)合力計(jì)算
總鐵結(jié)合能力定義：37℃條件下，每升血清結(jié)合Fe³⁺的μmol數(shù)。
總鐵結(jié)合能力TIBC（μmol/L）=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA2測(cè)÷ΔA2標(biāo)-C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA1測(cè)÷ΔA1標(biāo)
=250×（ΔA2測(cè)÷ΔA2標(biāo)-ΔA1測(cè)÷ΔA1標(biāo)）
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，0.25μmol/mL=250μmol/L。
注意事項(xiàng)：
1. A1測(cè)小于0.1時(shí)，建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。
2. 試劑二、試劑四有一定的毒性，操作時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取100μL用蒸餾水稀釋4倍的駱駝血清，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA1測(cè)=A1測(cè)-A1空=0.356，ΔA1標(biāo)=A1標(biāo)-A1空=0.669，ΔA2測(cè)=A2測(cè)-A2空=0.819，ΔA2標(biāo)=A2標(biāo)-A2空=0.519，計(jì)算總鐵結(jié)合能力得：總鐵結(jié)合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2測(cè)÷ΔA2標(biāo)-ΔA1測(cè)÷ΔA1標(biāo)）×4=1045.897 μmol/L。

2. 取100μL用蒸餾水稀釋8倍的鵝血清，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA1測(cè)=A1測(cè)-A1空=0.588，ΔA1標(biāo)=A1標(biāo)-A1空=0.669，ΔA2測(cè)=A2測(cè)-A2空=0.797，ΔA2標(biāo)=A2標(biāo)-A2空=0.519，計(jì)算總鐵結(jié)合能力得：總鐵結(jié)合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2測(cè)÷ΔA2標(biāo)-ΔA1測(cè)÷ΔA1標(biāo)）×8=1313.443 μmol/L。

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