葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC2500
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑一：1μmol/mL葡萄糖溶液；
2、混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。
產(chǎn)品說(shuō)明：
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶（Peroxidase，POD）催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安替*林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm 有特征吸收峰。


技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.01 μmol/mL
線(xiàn)性范圍：0.015-3 μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積（mL）為1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸10 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。

2. 細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 蒸餾水），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3 s，間隔10 s，重復(fù)30次），置沸水浴中煮沸10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫后，8000g，25℃離心10min，取上清液備用。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

渦旋混勻，置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)15min后，于505nm波長(zhǎng)處讀取吸光度A，分別記為A空白、A標(biāo)準(zhǔn)和A測(cè)定。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。（空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2次）。
三、葡萄糖含量計(jì)算

1. 按蛋白濃度計(jì)算

葡萄糖含量（µmol/mg prot）= C ×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（Cpr×V樣）=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

葡萄糖含量（µmol/g 質(zhì)量）= C ×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（W÷V樣總×V樣）= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) ÷W

1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

葡萄糖含量（µmol/10⁶ cell）= C ×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（5÷V樣總×V樣）= 0.2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C：葡萄糖溶液濃度，1µmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入的樣本體積，100µL=0.1mL；V樣總：樣本總體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；5：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（以10⁶計(jì)），5×10⁶個(gè)。
注意事項(xiàng)：
若（A測(cè)定-A空白）小于0.005，建議加大提取樣本質(zhì)量（或細(xì)胞數(shù)量）或者樣本上清液的加入量；（A測(cè)定-A空白）大于1.5，將上清液用蒸餾水稀釋即可。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 
   

1. 
   

2. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清；再用蒸餾水稀釋2倍后按測(cè)定步驟測(cè)定，用玻璃比色皿得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.758-0.006=0.752，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.600-0.006=0.594。按樣本質(zhì)量計(jì)算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/g 質(zhì)量）= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2（稀釋倍數(shù)）=0.752÷0.594÷0.1×2= 25.320 μmol/ g 質(zhì)量

1. 
   

1. 
   

2. 取0.1g綠蘿葉片加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清后按測(cè)定步驟測(cè)定，用玻璃比色皿測(cè)得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.539-0.006=0.533，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.600-0.006=0.594。按樣本質(zhì)量計(jì)算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/g 質(zhì)量）= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=0.533÷0.594÷0.1=8.972 μmol/ g 質(zhì)量

1. 
   

1. 
   

2. 取5百萬(wàn)Jurkat細(xì)胞樣本加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清后按測(cè)定步驟測(cè)定，用玻璃比色皿測(cè)得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.018-0.006=0.012，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.600-0.006=0.594。按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

3. 
   

葡萄糖含量（μmol/10⁶ cell)  = 0.2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.2×0.012÷0.594=4.040×10^-3 μmol/10⁶ cell
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion. Cell Death and Disease. March 2019; (IF5.959)
[2] Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019; 153:152-160. (IF2.87)
參考文獻(xiàn)：
[1] Basagni U, Bonicolini F. Ready to use liquid reagent for determining the glucose content in blood: U.S. Patent 5,077,199[P]. 1991-12-31.
[2] Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Enzymatic blood glucose determination by colorimetry of N, N-diethylaniline-4-aminoantipyrine[J]. Clinical chemistry, 1974, 20(5): 606-607.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0340/BC0345 糖原含量檢測(cè)試劑盒
BC2540/BC2545 纖維素酶（CL）活性檢測(cè)試劑盒
BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
BC2490/BC2495 血糖含量檢測(cè)試劑盒  

葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 糖代謝系列 葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 糖代謝系列