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  • 磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 微量法
產(chǎn)品名稱:

磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-09
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位

英文名稱
Phospholipase D(PLD)Activity Assay Kit
別名
磷脂酶D試劑盒 PLD Kit 磷脂酶D(PLD)試劑盒 磷脂酶D(PLD)測試盒
磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒 微量法
規(guī)格
100T/96S
自備試劑
該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC2415
規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途磷脂酶D(PLD)檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

磷脂酶DPLD)活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號:BC2415

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液一

液體110mL×1

2-8℃保存

提取液二

液體0.6mL×2

-20℃保存

試劑一

液體120mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體5mL×1

2-8℃保存

試劑三

粉劑×2

2-8℃保存

試劑四

液體20mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1.提取液二:試劑易揮發(fā),用完后快速擰蓋,封口纏口;

2.試劑三:試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃管中臨用前取一支加入1.26 mL乙醇充分溶解后取上清使用2-8℃可以分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;

3.標(biāo)準(zhǔn)品:50umol/mL 膽*溶液,臨用前用試劑一稀釋100倍即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用(可以取10μL50umol/mL 膽*溶液加入990μL試劑一混勻即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 )。

產(chǎn)品說明:

磷脂酶DPhospholipases D,PLD)催化水解磷脂酰膽*末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽*,膽*在膽*氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安*比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、超速冷凍離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、天平、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

1、 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例加入提取液,建議稱取約0.1g樣本,加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二,冰浴勻漿后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

2、 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

3、 血清(漿):直接測定。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長到500nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定:

試劑名稱 (μL)

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

試劑一

20

-

-

試劑二

30

30

30

標(biāo)準(zhǔn)品

-

20

-

 

-

-

20

試劑三

20

20

20

充分混勻,30℃反應(yīng)30min,沸水浴5min,打開蓋子,自然冷卻2min。

試劑四

140

140

140

30℃反應(yīng)30min,測定500nm處吸光值,分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測定管。計算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=
A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管,ΔA測定=A測定管-A空白管。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

三、酶活計算

1、 按蛋白濃度計算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性 (U/mg prot) =ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷(Cpr×V提取)÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

2、 按樣本質(zhì)量計算

酶活定義:每克組織每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位

PLD活性 (U/g 鮮重) = ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷W÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

3、 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義:每104個細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性(U/104 cell= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量

4、 按血清(漿)計算:

酶活定義:每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性(U/mL= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V血清(漿)÷V血清(漿)÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液濃度,500nmol/mL;V提?。杭尤氲奶崛∫后w積(提取液一+提取液二),1mLV血清(漿):血(漿)體積,0.02mLW:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以萬計;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時間,30min

注意事項(xiàng):

1. 顯色完成后,若有沉淀,于8000g,25℃離心5min后取上清測定。

2. 吸光值不宜超過1,否則用試劑一將酶液進(jìn)行稀釋,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC2420/BC2425   磷脂酶CPLC)活性檢測試劑盒

BC2430/BC2435   磷脂酶A2PLA2)活性檢測試劑盒

 

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