堿性木聚糖酶（BAX）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3615
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 標準品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標準液，2-8℃保存8周。

產(chǎn)品說明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，堿性木聚糖酶（BAX）一般分離自最適生長pH為9-11的微生物。
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置冰上作為待測樣本。
2、組織樣本：稱0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。4℃，8000rpm離心15min，取上清置冰上待測。
3、酶干粉：稱1mg，加1mL緩沖液溶解后置冰上待測。
注：含還原糖較高的樣本（如植物果實等）可用蒸餾水進行適當稀釋后再進行測定。
二、測定步驟

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

2. 標準溶液的稀釋：臨用前按下表將標準品稀釋為6、5、4、3、2、1μmol/mL的標準溶液待測。

備注：實驗中每管需要60μL。

1. 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

注意事項：
吸光度變化應該控制在0.01~1.2之間，否則加大樣本量或稀釋樣本，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。
實驗實例：

1. 取0.1179g橙子加入1mL緩沖液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋10倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=1.194-1.040=0.154，帶入標曲y=0.2017x-0.1171（R²=0.999），計算x=1.344，按樣本質(zhì)量計算BAX活性得：BAX活力（U/g 質(zhì)量）= x÷W2÷30×F =1.344÷0.1179÷30×10=3.80 U/g 質(zhì)量。

2. 取泡菜汁離心取上清按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.925-0.169=0.756，帶入標曲y=0.2017x-0.1171（R²=0.999），計算x=4.329，按發(fā)酵液計算BAX活力得：BAX活力（U/mL）= x÷T×F =4.329÷30×1=0.144U/mL。

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