脂蛋白酯酶（LPL）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC2440
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1支加入1.5 mL丙 酮溶解備用，用不完的試劑-20℃保存4周；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：5 μmol/mL對(duì)硝基 *酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。臨用前取30μL 5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，加入450μL試劑一充分混勻，配制成0.3125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積）。

產(chǎn)品說(shuō)明：
脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解為脂肪酸和單酸甘油酯，主要在肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成，在脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基 苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基*酚，在400nm有特征吸收峰。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、EP管、冰、丙 酮和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表：在1.5mL EP管中進(jìn)行下列操作：

三、LPL活性計(jì)算
1、血清（漿）LPL活力計(jì)算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基 *酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LPL活力計(jì)算
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基*酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：
單位定義：在45℃，pH7.5條件下，每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝*酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，0.3125μmol/mL；V提?。杭尤朐噭┮惑w積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；N：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，以萬(wàn)計(jì)；1000：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1μmol=1000nmol。
注意事項(xiàng)：

1. 測(cè)定管加入試劑二后混變渾濁為正?，F(xiàn)象。

2. 若A大于1，將粗酶液用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g大鼠肌肉加入1mL試劑一，取上清后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管- A對(duì)照管=0.697-0.160=0.537，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：LPL（U/g 質(zhì)量）= 31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=31.25×0.537÷0.544÷0.1=308.48 U/g 質(zhì)量。

2. 取兔血清稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A測(cè)定管- A對(duì)照管=0.639-0.096=0.543，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按血清（漿）體積計(jì)算酶活得：LPL（U/mL）= 31.25×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×2（稀釋倍數(shù)）=31.25×0.543÷0.544×2（稀釋倍數(shù)）=62.39 U/mL。

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