品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC5085 |
規(guī)格 | 100T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | β-羥丁酸含量檢測 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
β-羥丁酸(β-HB)含量檢測試劑盒(WST法)說明書
微量法
貨號:BC5085
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
顯色液 | 液體1.5mL×1支 | -20℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑二:臨用前取一支加入600μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。
2、 試劑三:臨用前取一支加入400μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存,可以保存2周。避免反復(fù)凍融。(試劑三由于不便保存,故多給一支)
3、 標(biāo)準(zhǔn)品:8mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入980μL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。4℃保存1個月。
4、 工作液配制:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照170:8:2(共180μL,1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min(此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完。
產(chǎn)品說明:
β-羥丁酸(β-HB),在嚴(yán)重酸中毒患者體內(nèi),由于酸中毒使患者體內(nèi)NADH生成增加,進(jìn)而促使β-羥丁酸與乙酰乙酸的比值自正常的2:1提高至16:1。β-羥丁酸在檢測糖尿病酮癥酸中毒診斷、治療中有重要意義,對糖尿病的早期診斷也有重要意義。本試劑盒適用于血清、血漿、尿液等樣本
在pH8.8和37℃條件下,β-HB在β-羥丁酸脫氫酶(HBDH)催化下發(fā)生反應(yīng),同時NAD+被還原成NADH;在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應(yīng),產(chǎn)生水溶性formazan,在450nm下有特征吸收峰。通過檢測450nm下波長變化,可計(jì)算出β-HB的含量。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸餾水。
操作步驟:
適用樣本
血清、血漿、尿液等樣本,直接檢測即可,若溶液有渾濁可離心后進(jìn)行測定
二、測定步驟
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至450 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋至0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。
3、 按下表步驟加樣:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本 | 20 | 20 | ||
蒸餾水 | 20 | |||
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | 20 | |||
工作液 | 180 | 180 | 180 | |
試劑一 | 180 | |||
37℃條件下反應(yīng)10 min | ||||
顯色液 | 10 | 10 | 10 | 10 |
37℃條件下避光反應(yīng)20 min后,取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中,于450 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠苤恍枳?/span>1-2次;標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。 |
三、β-HB含量計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以β-HB標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)(x,mg/mL),以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程求得x(mg/mL)。
2、 計(jì)算公式
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
β-HB含量(μmol /mg prot)=x×V樣÷(V樣×Cpr)÷126.09×1000=7.931x÷Cpr
(2)按照血清(漿)體積計(jì)算
β-HB含量(μmol /mL)=x×V樣÷V樣÷126.09×1000=7.931x
V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,20 μL=0.02 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;126.09:β-羥基丁酸鈉的分子量,mg/mmol;1000:1mmol=1000μmol。
注意事項(xiàng):
1、顯色完成后,請?jiān)?/span>10 min之內(nèi)完成檢測。
2、如果ΔA測定低于或超過標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光值范圍,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1. 取20μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用96孔板測定后進(jìn)行計(jì)算ΔA測定=A測定-A對照=0.455-0.082=0.373,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.4913x+0.0043,得x=0.750。計(jì)算
β-HB含量(μmol /mL)=7.931x=5.948 μmol /mL
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