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  • 乙酰乙酸含量檢測試劑 微量法
產(chǎn)品名稱:

乙酰乙酸含量檢測試劑 微量法

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-08
乙酰乙酸含量檢測試劑 微量法
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位

英文名稱
Acetoacetate(AcAc)Content Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC5075
規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途乙酰乙酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

乙酰乙酸(AcAc)含量檢測試劑盒(WST法)說明書

                                          微量法

貨號BC5075

規(guī)格100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體110mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體25mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×2

-20℃保存

試劑三

粉劑×2

-20℃保存

顯色液

液體1.5mL×1

-20℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

粉劑×1

-20℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:臨用前取一支加入600μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融。

2、 試劑三:臨用前取一支加入400μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存,可以保存2周。避免反復(fù)凍融。(試劑三由于不便保存,故多給一支)

3、 標(biāo)準(zhǔn)品:8mg 乙酰乙酸鋰。臨用前加入950μL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL 乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液。-20℃分裝保存4周。

4、 工作液配制:臨用前根據(jù)試驗所需量將試劑一、試劑二、試劑三按照170:8:2180μL,1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完。

產(chǎn)品說明

乙酰乙酸(AcAc)是酮體的重要成分之一,約占正常人酮體總量20%,是脂肪酸通過氧化產(chǎn)生的,是一種較強(qiáng)的有機(jī)酸。正常含量的乙酰乙酸對人體無害,糖尿病患者由于糖的利用降低,或饑餓時由于糖的代謝障礙,大量動用脂肪,乙酰乙酸的量都會積累。乙酰乙酸即可轉(zhuǎn)化成丙酮,也可以轉(zhuǎn)化成β-羥丁酸。

在檢測中,乙酰乙酸通過偶聯(lián)酶反應(yīng)產(chǎn)生450nm吸收峰的產(chǎn)物,與存在的乙酰乙酸成比例。

注意:實(shí)驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、超聲波細(xì)胞破碎儀、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、組織樣本的制備:按照質(zhì)量(g: 提取液體積(mL)1: 5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000 g離心10 min后取上清待測。

 

2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000 g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)等其它液體樣本:直接測定。

二、測定步驟

1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至450 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:將80mg/mL 乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液,用蒸餾水稀釋至0.25、0.2、0.15、0.1、0.05、0.025、0.01250.00625 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

3、 按下表步驟加樣:

試劑名稱(μL

測定管

對照管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣本

20

20



蒸餾水



20


標(biāo)準(zhǔn)溶液




20

工作液

180


180

180

試劑


180



37℃條件下反應(yīng)10 min

顯色液

10

10

10

10

37℃條件下避光反應(yīng)20 min

200μL96孔板或微量玻璃比色皿中,于450 nm處測定吸光度。分別記為A測定、A對照、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測定=A空白-A測定-A對照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A空白-A標(biāo)準(zhǔn)。空白管只需做1-2次。

三、AcAc含量計算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:以乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)(x,mg/mL),以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性回歸方程y=kx+b,將ΔA測定帶入方程求得xmg/mL)。

2、 計算公式

1)按照蛋白濃度計算

AcAc含量(μmol/mg prot=x×V÷V×Cpr÷108.02×1000÷108.02=9.258x÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

AcAc含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)×1000÷108.02=9.258x÷W

3)按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計算

AcAc含量(μmol/104 cell=x×V÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷108.02×1000=9.258x÷細(xì)胞數(shù)量

4)按照血清(漿)體積計算

AcAc含量(μmol/mL=x×V÷V÷108.02=9.258x

V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,20 μL=0.02 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以104計;V樣總:加入提取液體積,1 mL;108.02:乙酰乙酸鋰分子量,mg/mmol

注意事項

1、顯色完成后,請在15min之內(nèi)完成檢測。

2、如果測定吸光值低于或超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。


實(shí)驗實(shí)例

1. 20 μL 牛血清按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗,用96孔板測定后進(jìn)行計算ΔA測定=A空白-A測定-A對照)=0.802-0.837-0.076=0.041,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.2259x+0.0145,計算x=0.117。計算

AcAc含量(μmol/mL=9.258x=1.082μmol/mL

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

BC2150/BC2155  檸檬酸(CA)含量檢測試劑盒

BC0950/BC0955  琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

BC0380/BC0385  丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

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 乙酰乙酸含量檢測試劑 微量法 乙酰乙酸含量檢測試劑 微量法

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