品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢(xún) |
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分子式 | 詳詢(xún) | 純度 | 詳詢(xún) |
分子量 | 詳詢(xún) | 貨號(hào) | BC5055 |
規(guī)格 | 100T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 血清淀*酶活性檢測(cè) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
血清淀*酶(AMY)活性檢測(cè)試劑盒(碘-淀粉比色法)說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào):BC5055
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
規(guī)格 | 保存條件 | |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三A | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三B | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前加入12.5mL試劑二,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解;用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。
2、 試劑三的配制:將試劑三A倒入試劑三B中,用蒸餾水定容至10mL,2-8℃避光保存一個(gè)月。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品。臨用前加10mL試劑二,置于常溫水中并加熱至煮沸,配成1mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液。用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。
產(chǎn)品說(shuō)明:
血清淀*酶( Serum amylase, AMY) 屬于α-淀*酶,以無(wú)規(guī)則方式水解多糖分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵,生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌,另外近端十二指腸、肺、子宮、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解,產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等,碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合,生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物,其深淺可計(jì)算出淀*酶的活力單位。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取
取40μL血清和160μL蒸餾水混合(即將血清稀釋5倍),分為2管100μL分別作為測(cè)定管和對(duì)照管。若實(shí)驗(yàn)后所測(cè)數(shù)值偏大或者偏小,可以調(diào)整稀釋比例(比如數(shù)值偏小可以將80μL血清和120μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍)
二、測(cè)定步驟和加樣表
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm,蒸餾水調(diào)零。
將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
按操作表依次加入各試劑:
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 空白管1 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管2 | |
血清稀釋液 | 100 | 100 | - | - | - |
蒸餾水 | - | - | 100 | - | 100 |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | - | 100 | - |
試劑一 | 100 | - | 100 | - | - |
試劑二 | - | 100 | - | 100 | 100 |
在37℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫10min | |||||
試劑三 | 50 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中,于15min內(nèi)讀取測(cè)定管、對(duì)照管、空白管1、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管2 在570nm下的吸光度,分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A空白1、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白2,計(jì)算ΔA測(cè)定=(A空白1-A空白2)-(A測(cè)定-A對(duì)照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白2。
三、AMY活性計(jì)算
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到方程y=kx+b。將ΔA測(cè)定帶入方程得到x(mg/mL)。
2、按照血清體積計(jì)算:
單位定義:每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個(gè)酶活性單位。
AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F
V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10min;F:稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng):
1. ΔA測(cè)定大于1.5時(shí),可以對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
2. 反應(yīng)完成后需在15min內(nèi)測(cè)定吸光度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、 取40μL牛血清和160μL蒸餾水混合(即血清稀釋5倍)后,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A空白-(A測(cè)定-A對(duì)照)=(1.409-0.067)-(1.297-0.058)=0.103,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.6047x-0.0165,計(jì)算x=0.0459,按公式計(jì)算活性:
AMY(U/mL)= x×V樣÷V樣÷T=0.1×x×F=0.1×x×F =0.0230 U/ mL。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0700/ BC0705 淀粉含量檢測(cè)試劑盒
BC4260/ BC4265 直鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒
BC4270/ BC4275 支鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒
BC4570/ BC4575 α-淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 (碘-淀粉比色法)
BC4580/ BC4585 β-淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 (碘-淀粉比色法
血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法