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產(chǎn)品目錄
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  • 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝
產(chǎn)品名稱:

硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-17
硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
單位

英文名稱
Nitrate Reductase (NR) Assay Kit(Griess-Colorimetric Method)
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC4960
規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途硝酸還原酶(NR)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

硝酸還原酶NR活性檢測試劑盒Griess顯色法)說明書

可見分光光度法

貨號:BC4960

規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

誘導(dǎo)劑儲備液

液體50 mL×1

2-8℃保存

提取液

液體30mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體12 mL×1

-20℃保存

試劑二

粉劑×2

-20℃保存

試劑三

液體15 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體15 mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 誘導(dǎo)液:將誘導(dǎo)劑儲備液用蒸餾水10倍稀釋后使用,即取10 mL誘導(dǎo)劑儲備液加90 mL蒸餾水,充分混勻。現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、 試劑二:加入1mL蒸餾水,-20℃分裝保存,可以-20℃保存2周。臨用前用蒸餾水將試劑二稀釋50倍,備用,即取10 μL試劑二加入490 μL蒸餾水混勻。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL亞硝*標(biāo)準(zhǔn)溶液。臨用前將用蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋100倍得到0.1 μmol/mL的亞硝*標(biāo)準(zhǔn)液,備用。

產(chǎn)品說明:

NREC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。NR催化硝酸鹽還原為亞*鹽,NO3ˉ +NADH+H→NO2ˉ+NAD+H2O。在酸性條件下,產(chǎn)生的NO2ˉ能夠參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物,這種紫紅色化合物在540 nm處有吸收峰,540 nm下吸光值的變化即可表示酶活。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺式離心機、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、組織前處理:

1) 取適量誘導(dǎo)于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)液中(淹沒即可),避光浸泡2 h,取出樣本,濾紙吸干后,-20℃冷凍30 min,取出樣本,濾紙吸干。(根據(jù)需要進(jìn)行誘導(dǎo)處理,一般不需要誘導(dǎo)處理,預(yù)實驗結(jié)果沒有活性則需要進(jìn)行誘導(dǎo)處理)

 

2) 按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5~10的比例(稱取約0.1 g樣本,加入1 mL提取液),冰浴研磨,8000g4℃離心10 min,取上清置冰上待測。

2、細(xì)胞或細(xì)菌的前處理:

先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。8000g,4離心10min,取上清,置冰上待測。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至540 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定:

試劑名稱(μL

測定管

對照管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

100

100

-

-

0.1 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液

-

-

100

-

蒸餾水

-

375

-

475

試劑一

375

-

375

-

試劑二

125

125

125

125

混勻,37℃(哺乳動物)25℃(其他物種)反應(yīng)30 min

試劑三

250

250

250

250

試劑四

250

250

250

250

混勻,室溫顯色20 min后測定540nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。

三、NR活性計算

1)按樣本蛋白濃度計算:

酶活定義:每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

NR活力(U/mg prot= C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷V樣本×Cpr÷T×F

= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷Cpr×F

2)按樣本質(zhì)量計算:

酶活定義:每小時每g組織催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

NR活力(U/g 質(zhì)量)=C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷W×V樣本÷V提?。?/span>÷T×F

= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W×F

3)按細(xì)胞數(shù)量計算:

酶活定義:每小時每1萬個細(xì)胞或細(xì)菌催化產(chǎn)生1 μmol NO2-的量為1NR活力單位。

NR活力(U/104 cell

=C標(biāo)準(zhǔn)×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×V樣本÷(細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量×V樣本÷V提?。?/span>÷T×F

=0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量×F

C標(biāo)準(zhǔn):亞硝 *標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.1 μmol/mL;V提?。杭尤胩崛∫后w積,1 mL;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,0.5 h;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLV樣本:加入的樣本體積,0.1 mL;細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量:以萬計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項:

1. 吸光度大于0.8時,建議用提取液稀釋樣本,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2. 嚴(yán)格按照樣本測定表格列出順序加入試劑進(jìn)行實驗。

實驗實例:

1. 0.1 g綠蘿葉片加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,離心取上清按照測定步驟操作,測得A測定=0.072、A對照=0.051A標(biāo)準(zhǔn)=0.363、A空白=0.005,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

NR活力(U/g 質(zhì)量)= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W= 0.117 U/g 質(zhì)量。

2. 0.1 g洋桔梗葉片加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,離心取上清按照測定步驟操作,測得A測定=0.063、A對照=0.032、A標(biāo)準(zhǔn)=0.363、A空白=0.005,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

NR活力(U/g 質(zhì)量)= 0.2×A測定-A對照)÷A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W= 0.173 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC0070/BC0075  谷*酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒

BC0910/BC0915  谷氨*胺合成酶(GS)活性檢測試劑盒

BC1500/BC1505  植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒

BC1520/BC1525  植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒

硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒 氮代謝

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