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| 品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
| 分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC5295 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 主要用途 | 植物根系活力檢測 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
植物根系活力檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作
貨號：BC529
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體110 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑三：臨用前加入18 mL蒸餾水，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。未用完的試劑2-8℃可以保存4周。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品：0.4 mg/mL α-標(biāo)準(zhǔn)品。
產(chǎn)品說明：
根系是植物吸收水分和礦質(zhì)營養(yǎng)的主要器官，同時(shí)又是植物體中重要物質(zhì)如氨基酸、激素等物質(zhì)合成、同化、轉(zhuǎn)化的器官，因此根的生長情況和活動(dòng)能力直接影響植物個(gè)體的生長情況、營養(yǎng)水平和產(chǎn)量水平等，根系活力具有重要的實(shí)際意義。
植物根系能氧化吸附在根表面的α-，生成紅色的α-羥基-1-，沉淀于有氧化力的根的表面，使這部分染成紅色。α-在酸性條件下于對氨基 苯磺酸鈉和亞硝酸鹽作用生成紅色的偶氮染料。根系活力可以通過α-減少量來表示。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、濾紙、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
樣本的制備：將根部組織洗凈，去除根上的泥土，輕輕擦干，不要過分?jǐn)D壓破壞根系細(xì)胞。稱取0.2g于5mL EP 管中。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至520nm，可見分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：將0.4mg/mL α-標(biāo)準(zhǔn)品用試劑一稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。（0mg/mL記為標(biāo)準(zhǔn)空白管）
3、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)品體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 0.4 | 100 | - | 0.4 |
2 | 0.4 | 200 | 200 | 0.2 |
3 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
4 | 0.1 | 200 | 200 | 0.05 |
5 | 0.05 | 200 | 200 | 0.025 |
6 | 0.025 | 200 | 200 | 0.0125 |
7 | 0.0125 | 200 | 200 | 0.00625 |
8 | 0.00625 | 200 | 200 | 0.003125 |
9 | 0.003125 | 200 | 200 | 0.0015625 |
10 | 0 | - | 200 | 0（標(biāo)準(zhǔn)空白管） |
備注：下述實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需75µL標(biāo)準(zhǔn)品（注意不要在此步驟直接檢測標(biāo)準(zhǔn)品吸光值）。
4、在5mLEP管按下表步驟加樣：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本 | 0.2g | - | - |
試劑二 | 2000 | 2000 | - |
37℃避光反應(yīng)，在反應(yīng)10min和3h 10min時(shí)測定管和空白管需要各吸取75μL反應(yīng)液進(jìn)行下述第二步反應(yīng)。 第二步反應(yīng)需要先按下表在新的1.5mL EP管中加入試劑三和試劑四，再吸取75μL上述第一步反應(yīng)液于EP管中。注：需要先加試劑三和試劑四，再加反應(yīng)液，一定不能顛倒順序！ | - | ||
試劑三 | 75 | 75 | 75 |
試劑四 | 75 | 75 | 75 |
第一步反應(yīng)液 | 75 | 75 | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | 75 |
充分混勻，室溫顯色20min，取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，測定在520nm處的吸光度，顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測。10min所對應(yīng)的吸光值記作A1，3h10min所對應(yīng)的吸光值記作A2。計(jì)算?A測定=A1測定-A2測定，?A空白=A1空白-A2空白，?A =?A測定-?空白，?A標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白管。（標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次。）
三、根系活力計(jì)算
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)（y，ΔA標(biāo)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，?A）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，mg/mL）。
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算：以氧化的α-的量來表示根系活力
根系活力 [ μg / (g·h) ]=x×V試劑二×103÷(W×T)=666.67×x÷W
103：單位換算，1mg/mL=103μg /mL；V試劑二：試劑二的體積，2mL；W：根系質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h。
注意事項(xiàng)：
1、 在EP管/96孔板內(nèi)加入試劑三、試劑四以及樣本的順序不可改變。
2、 如果?A結(jié)果不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，可以減少樣本質(zhì)量（或者減少第一步反應(yīng)時(shí)間）或者增加樣本質(zhì)量（或者增加第一步反應(yīng)時(shí)間）。
3、 顯色后需要在20min內(nèi)完成檢測。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 稱取0.2081g豆芽的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用96孔板測得計(jì)算?A測定=A1測定-A2測定=1.449-1.328=0.121，?A空白=A1空白-A2空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測定-?A空白=0.121-0.068=0.053，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3.2172x+0.0031，計(jì)算得x=0.016mg/mL,帶入公式計(jì)算：
根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=51.25 μg / (g·h)
2、 稱取0.2031g景天的根部，洗凈，擦干，按照測定步驟操作，用96孔板測得計(jì)算?A測定=A1測定-A2測定=1.517-1.424=0.093，?A空白=A1空白-A2空白=1.555-1.487=0.068，?A =?A測定-?A空白=0.093-0.068=0.025，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=3.2172x+0.0031，計(jì)算得x=0.007mg/mL,帶入公式計(jì)算：
根系活力 [ μg / (g·h) ] = 666.67×x÷W=22.98 μg / (g·h)
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC3120/BC3125 植物脫氫酶（PDHA）活性檢測試劑盒
BC5270/BC5275 植物根系活力檢測試劑盒（TTC法）
植物根系活力檢測試劑盒 微量法 植物根系活力檢測試劑盒 微量法
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