土壤錳過氧化物酶（S-Mnp)活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC1955

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：甲苯，需自備。

2. 試劑三：臨用前加入3.5mL蒸餾水，用不完的試劑可在2-8℃保存3個月，禁止放置于-20℃。

產(chǎn)品說明：

錳過氧化物酶 (EC1.11.1.13) 是一種含鐵血紅素的過氧化物酶，其廣泛存在于白腐擔(dān)子真菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，是木質(zhì)素起始降解的關(guān)鍵酶，能有效地降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物、疊氮化合物、DTT、多環(huán)方烴等，在農(nóng)業(yè)廢棄物處理、生物降解、生物漂白、染料脫色等領(lǐng)域有較多的研究和應(yīng)用。

錳過氧化物酶在Mn²⁺存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。 

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯、30-50目篩和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃風(fēng)干，過30-50目篩。

二、測定步驟

1、分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至465nm，分光光度計需用蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑)：

三、S-Mnp活力的計算

a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下：

酶活性定義：每克土壤每小時氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

S-Mnp活性（U/g 土樣）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷W÷T=12.121×ΔA÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.44×10^-3L；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h；10⁹：換算系數(shù)，1mol=10⁹ nmol。

b.用96孔板測定的計算公式如下：

酶活性定義：每克土壤每小時氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。

S-Mnp活性（U/g）=ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹÷W÷T=20.202×ΔA÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.6cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.44×10^-3L；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，3h。

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