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  • 精*酸(Arg)含量檢測試劑盒 氨基酸
產(chǎn)品名稱:

精*酸(Arg)含量檢測試劑盒 氨基酸

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
儲存條件
2-8℃
中文名稱
精*酸(Arg)含量檢測試劑盒 氨基酸
單位

有效期
6個月
英文名稱
Arginine(Arg)Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法
規(guī)格
50T/48S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC5630
規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途精*酸(Arg)含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

精*酸(Arg)含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號:BC5630

規(guī)格:50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液一

液體60 mL×1

2-8℃保存

提取液二

液體9 mL×1

2-8℃保存

試劑一

粉劑×1

2-8℃保存

試劑二

液體15 mL×1

2-8℃保存

試劑三

液體15 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體15 mL×1

2-8℃保存

標準品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑一:臨用前加入1.5mL無水乙醇,充分溶解。-20℃可以保存4周。

2、 工作液配制:根據(jù)樣本量按照試劑一:試劑二=50μL450μL500μL,2T)的比例配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、 標準品:臨用前加入0.918 mL蒸餾水,充分溶解,配制成62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液。臨用前取10μL62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液于EP管中,加入790 μL蒸餾水充分溶解,配制成0.78125 μmol/mL的精*酸標準溶液。

產(chǎn)品說明:

精*酸(Arginine)是人體和動物體內(nèi)的半必需氨基酸,在機體中參與蛋白質(zhì)的合成代謝、以及多胺和NO的合成,起著重要的生理作用。精*酸有降低血壓的作用,在體內(nèi)精*酸能夠分解成為一氧化氮,一氧化氮能松弛血管壁平滑肌,調(diào)節(jié)血管彈性,對血管內(nèi)膜有修復作用。精*酸能夠刺激并誘導腎上腺激素分泌,從而降低血糖,減少身體中脂肪酸的生產(chǎn),能使高血糖患者的血糖降至正常水平。

精*酸在堿性介質(zhì)中與甲萘酚和次氯酸鈉生成紅色生成物,其在525nm處有特征吸收峰,以此計算精*酸含量。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、渦旋混勻儀、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。

操作步驟:

一、 樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

 

組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

細胞:按照細胞數(shù)量(106個):提取液一體積(mL)為5~11的比例(建議5百萬細胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至525nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 1.5mLEP管中按下表步驟加樣:

試劑名稱(μL

測定管

標準管

空白管

樣本

250

-

-

標準品

-

250

-

蒸餾水

-

-

250

工作液

250

250

250

避光、冰浴20min

試劑三

250

250

250

充分震蕩30s

試劑四

250

250

250

    充分混勻后,冰浴反應2min,于比色皿中測定在525nm處的吸光度,記作A測定,A標準,A空白。?A測定=A測定-A空白,?A標準=A標準-A空白。(標準管和空白管只需做1-2次)

三、精*酸(Arg)含量計算

(1) 按樣本蛋白濃度計算

Arg含量μmol/mg prot=C標準×?A測定÷?A標準×V÷Cpr×V×F = 0.781×?A測定÷?A標準÷Cpr×F

(2) 按樣本質(zhì)量計算

Arg含量μmol/g 質(zhì)量)= C標準×?A測定÷?A標準×V上清+V提取液二÷W×V上清÷V提取液一×F

= 0.928×?A測定÷?A標準÷W×F

(3) 按細菌或細胞數(shù)量計算

Arg含量μmol/106 cell= C標準×?A測定÷?A標準×V上清+V提取液二÷V上清÷V提取液一×F
= 0.928×?A測定÷?A標準÷N×F

(4) 按液體體積計算

Arg含量μmol/mL= C標準×?A測定÷?A標準×V上清+V提取液二÷V液體×V上清÷V液體+V提取液一))×F

= 10.205×?A測定÷?A標準×F

C標準精*酸標準溶液濃度,0.78125 μmol/mLV:反應體系中加入的樣本體積,0.25mLV上清:提取時上清的體積,0.8mLV提取液二:加入提取液二的體積,0.15mLV提取液一:加入提取液一的體積,1mL;V液體液體樣本體積,0.1mLCpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細胞或細菌數(shù)量,以106計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

 

 

 

注意事項:

1. 如果?A測定大于0.8,可以用蒸餾水對樣本進行稀釋;如果?A測定小于0.01,可以加大樣本量。最終計算時同步修改計算公式。

2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。

實驗實例:

1、 稱取0.1162g小鼠腎臟組織,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.582-0.227=0.355,?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5,帶入公式計算:

Arg含量μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測定÷?A標準÷W=5.670 μmol/g 質(zhì)量。

2、 稱取0.1186g花生組織,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.661-0.227=0.434?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5,帶入公式計算:

Arg含量μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測定÷?A標準÷W=6.792 μmol/g 質(zhì)量。

3、 取人血清按按前處理和實驗步驟進行實驗,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.314-0.227=0.087,?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5帶入公式計算:

Arg含量μmol/mL=10.205×?A測定÷?A標準×F =1.776 μmol/mL。

參考文獻:

[1] Francis P S, Barnett N W, Foitzik R C, et al. Chemiluminescence from the Sakaguchi reaction [J]. Analytical Biochemistry, 2004, 329(2):340-341.

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精*酸(Arg)含量檢測試劑盒 氨基酸 精*酸(Arg)含量檢測試劑盒 氨基酸

  

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