品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC5630 |
規(guī)格 | 50T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 精*酸(Arg)含量檢測 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
精*酸(Arg)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號:BC5630
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
規(guī)格 | 保存條件 | |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體9 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前加入1.5mL無水乙醇,充分溶解。-20℃可以保存4周。
2、 工作液配制:根據(jù)樣本量按照試劑一:試劑二=50μL:450μL(500μL,2T)的比例配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、 標準品:臨用前加入0.918 mL蒸餾水,充分溶解,配制成62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液。臨用前取10μL的62.5 μmol/mL 精*酸標準溶液于EP管中,加入790 μL蒸餾水充分溶解,配制成0.78125 μmol/mL的精*酸標準溶液。
產(chǎn)品說明:
精*酸(Arginine)是人體和動物體內(nèi)的半必需氨基酸,在機體中參與蛋白質(zhì)的合成代謝、以及多胺和NO的合成,起著重要的生理作用。精*酸有降低血壓的作用,在體內(nèi)精*酸能夠分解成為一氧化氮,一氧化氮能松弛血管壁平滑肌,調(diào)節(jié)血管彈性,對血管內(nèi)膜有修復作用。精*酸能夠刺激并誘導腎上腺激素分泌,從而降低血糖,減少身體中脂肪酸的生產(chǎn),能使高血糖患者的血糖降至正常水平。
精*酸在堿性介質(zhì)中與甲萘酚和次氯酸鈉生成紅色生成物,其在525nm處有特征吸收峰,以此計算精*酸含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、渦旋混勻儀、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。
操作步驟:
一、 樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
細胞:按照細胞數(shù)量(106個):提取液一體積(mL)為5~1:1的比例(建議5百萬細胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至525nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在1.5mLEP管中按下表步驟加樣:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 250 | - | - |
標準品 | - | 250 | - |
蒸餾水 | - | - | 250 |
工作液 | 250 | 250 | 250 |
避光、冰浴20min | |||
試劑三 | 250 | 250 | 250 |
充分震蕩30s | |||
試劑四 | 250 | 250 | 250 |
充分混勻后,冰浴反應2min,于比色皿中測定在525nm處的吸光度,記作A測定,A標準,A空白。?A測定=A測定-A空白,?A標準=A標準-A空白。(標準管和空白管只需做1-2次) |
三、精*酸(Arg)含量計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
Arg含量(μmol/mg prot)=C標準×?A測定÷?A標準×V樣÷(Cpr×V樣)×F = 0.781×?A測定÷?A標準÷Cpr×F
(2) 按樣本質(zhì)量計算
Arg含量(μmol/g 質(zhì)量)= C標準×?A測定÷?A標準×(V上清+V提取液二)÷(W×V上清÷V提取液一)×F
= 0.928×?A測定÷?A標準÷W×F
(3) 按細菌或細胞數(shù)量計算
Arg含量(μmol/106 cell)= C標準×?A測定÷?A標準×(V上清+V提取液二)÷(N÷V上清÷V提取液一)×F
= 0.928×?A測定÷?A標準÷N×F
(4) 按液體體積計算
Arg含量(μmol/mL)= C標準×?A測定÷?A標準×(V上清+V提取液二)÷(V液體×V上清÷(V液體+V提取液一))×F
= 10.205×?A測定÷?A標準×F
C標準:精*酸標準溶液濃度,0.78125 μmol/mL;V樣:反應體系中加入的樣本體積,0.25mL;V上清:提取時上清的體積,0.8mL;V提取液二:加入提取液二的體積,0.15mL;V提取液一:加入提取液一的體積,1mL;V液體:液體樣本體積,0.1mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細胞或細菌數(shù)量,以106計;F:樣本稀釋倍數(shù)。
注意事項:
1. 如果?A測定大于0.8,可以用蒸餾水對樣本進行稀釋;如果?A測定小于0.01,可以加大樣本量。最終計算時同步修改計算公式。
2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。
實驗實例:
1、 稱取0.1162g小鼠腎臟組織,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.582-0.227=0.355,?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5,帶入公式計算:
Arg含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測定÷?A標準÷W=5.670 μmol/g 質(zhì)量。
2、 稱取0.1186g花生組織,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.661-0.227=0.434,?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5,帶入公式計算:
Arg含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測定÷?A標準÷W=6.792 μmol/g 質(zhì)量。
3、 取人血清按按前處理和實驗步驟進行實驗,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A空白=0.314-0.227=0.087,?A標準=A標準-A空白=0.727-0.227=0.5,帶入公式計算:
Arg含量(μmol/mL)=10.205×?A測定÷?A標準×F =1.776 μmol/mL。
參考文獻:
[1] Francis P S, Barnett N W, Foitzik R C, et al. Chemiluminescence from the Sakaguchi reaction [J]. Analytical Biochemistry, 2004, 329(2):340-341.
相關系列產(chǎn)品:
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