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  • 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
產(chǎn)品名稱:

土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
廠商性質: 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
中文名稱
土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
單位

英文名稱
Soil Acidic xylanase (S-ACX)Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC5675
規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途組胺含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

土壤酸性木聚糖酶(S-ACX)活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號:BC5720

規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

緩沖液

液體40mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體20mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體17mL×1

2-8℃保存

標準品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 標準品稀釋液的配制:臨用前按緩沖液:試劑一=4.8mL2.4mL7.2mL,約一條標曲稀釋用量)的比例進行配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、 標準品:10mg木糖。臨用前加入667μL標準品稀釋液配制成100μmol/mL的木糖標準液,2-8℃保存8周。

產(chǎn)品說明:

土壤酸性木聚糖酶(Soil acid xylanase, S-ACX),又稱為土壤酸性半纖維素酶,主要分離自最適生長pH4-5的微生物。

在酸性環(huán)境中,S-ACX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應,在540nm處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,可計算S-ACX活性。

 

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30~50目篩。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至540nm,用蒸餾水調零。

2、 標準品的稀釋:臨用前將標準品用標準品稀釋液稀釋為1.51.2、1、0.80.6、0.4μmol/mL的標準溶液待測。

3、 標準品稀釋表:

 

 

序號

稀釋前濃度(μmol/mL

標準品體積(μL

稀釋液體積(μL

稀釋后濃度(μmol/mL

1

100

100

900

10

2

10

150

850

1.5

3

10

120

880

1.2

4

10

150

1350

1

5

1

400

100

0.8

6

1

300

200

0.6

7

1

200

300

0.4

備注:實驗中每管需要300μL

4、 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL

對照管

測定管

空白管

標準管

樣本

0.1g

0.1g

-

-

緩沖液

400

400

-

-

試劑一

-

200

-

-

渦旋混勻,置于50℃水浴鍋中反應2h,立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應體系),冷卻至室溫。

-

-

試劑一

200

-

-

-

常溫,12000g離心10min,取上清

-

-

上清液

300

300

-

-

標準品稀釋液

-

-

300


標準品

-

-

-

300

試劑二

200

200

200

200

渦旋混勻,沸水浴中準確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開,以免進水改變了反應體系),冷卻至室溫。

蒸餾水

500

500

500

500

充分混勻后,室溫12000g離心5min,取上清液于1mL玻璃比色皿中測定540nm下的吸光度,分別記為A對照、A測定、A空白、A標準。計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白??瞻坠芎蜆藴是€只需測1-2次。每個測定管需設一個對照管。

三、S-ACX計算公式

1. 標準曲線的繪制:

根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,μmol/mL)。

2. 土壤S-ACX活性計算:

酶活定義:50℃,pH 4.8條件下,每克土壤每小時分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活性單位。

S-ACX活性(U/g 土樣)=x× V反總÷W÷T×F=0.3×x÷W×F

V反總:反應體系總體積,0.6mLW:樣本質量,g;T:反應時間,2h;F:稀釋倍數(shù)。

 

注意事項:

1. 若樣本ΔA<0.01,可適當增大樣本量或者延長50℃反應時間后測定;若樣本ΔA>1.5或者A測定>1.5時,可用蒸餾水稀釋上清液后測定,注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

2. 建議使用螺旋管,防止沸水浴過程中蓋子爆開,改變反應體系。

實驗實例:

1、 0.1g森林土樣,按操作表進行第一步反應2h后,取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.302-0.049=0.253,帶入標曲y=0.5374x-0.1048 R2=0.9977),計算x=0.666,按樣本質量計算S-ACX活性得:

S-ACX活性(U/g 土樣)= 0.3×x÷W×F =3.996 U/g 土樣。

相關系列產(chǎn)品:

BC5730/BC5735  土壤中性木聚糖酶(S-NEX)活性檢測試劑盒

BC5740/BC5745  土壤堿性木聚糖酶(S-BAX)活性檢測試劑盒

 

土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒

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