品牌 | SOLARBIO/索萊寶 |
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商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià): | 選擇規(guī)格 |
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CA1610-300T | Solarbio | 300T | 1200.00元 |
溶解性(Solubility):溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液(20%)
多肽序列(Sequence):TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)
背景描述
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin,而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合,通常用來標(biāo)記組織切片,細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系中的F-actin,從而對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無論是動(dòng)植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,按照每一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識(shí)度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動(dòng)蛋白(Actin)抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降<1μg/mL,因此,可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為TRITC(四甲基異硫氰酸羅丹明)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對(duì)比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè)。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛。
我司提供儲(chǔ)存液形式(貨號(hào):CA1610,濃度為20μM)的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,用戶根據(jù)自身需求選擇。建議使用濃度為80~200nM。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃避光干燥保存, 1年有效。
注意事項(xiàng)
1)鬼筆環(huán)肽具有毒性,需小心操作(對(duì)人的半數(shù)致死劑量LD50約2mg/kg)。
2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
需要自備材料
1)(可選)甲醇
2)1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細(xì)胞培養(yǎng)(貨號(hào):P1020)
3)固定液4%多聚甲醛(溶于PBS緩沖液)(貨號(hào):P1110)
4)丙酮或透化液0.5% Triton X-100(溶于PBS緩沖液)
5)Fluoromount-GTM 水溶性封片劑(不含DAPI),DAPI
6)(可選)DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑(含DAPI)
7)(可選)BSA,標(biāo)準(zhǔn)
8)載玻片和蓋玻片
9)蓋玻片周圍密封液(如透明指甲油)
10)組裝有TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片,以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡
操作步驟
1. 工作液準(zhǔn)備
對(duì)于TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(貨號(hào):CA1610,300T)
本品以溶于甲醇的20μM儲(chǔ)存液形式提供,總量為300μl。按照100 nM的工作液濃度來換算,可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量,對(duì)母液進(jìn)行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。
開始實(shí)驗(yàn)前,使用1×PBS緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為:80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.染色步驟
1)細(xì)胞爬片生長(zhǎng)24h,使其密度達(dá)到50%匯合度。
2)吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞2次。
3)使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定10min。
注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。
4)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。
5)室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。
6)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。
7)取200μl配制好的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞,室溫避光孵育30min(通常情況下,4℃~37℃孵育皆可)。
注意:為了降低背景,可于TRITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液內(nèi)加入1% BSA;另外,孵育過程中為了避免溶液揮發(fā),可將蓋玻片轉(zhuǎn)移到一個(gè)密封的容器內(nèi)。
8)用PBS清洗蓋玻片3次,每次5min。
9)使用200μl DAPI溶液(濃度:100 nM)對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,約30s。
10)用PBS清洗蓋玻片,然后倒置在已經(jīng)滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑,然后用指甲油*封片。此法制備的標(biāo)本玻片可置于4℃避光保存,通常6個(gè)月內(nèi)可繼續(xù)做F-actin染色分析。
注意:也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑(貨號(hào):36308ES11)合并步驟9)10),簡(jiǎn)化步驟。
11)熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,選擇TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=545/570nm)和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。
對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽訂購(gòu)說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運(yùn)輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。