L-乳酸（L-LA）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2230
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前按試劑二（V）：蒸餾水（V）=10μL：450μL的比例配制試劑二溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

2. 試劑四：臨用前每瓶加入8 mL 蒸餾水混勻，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融，-20℃保存4周；

3. 標準品：臨用前加入1.04 mL蒸餾水配成100 μmol/mL 的標準溶液；2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說明：
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成*酸，同時使NAD⁺還原生成NADH和H⁺，H⁺傳遞給PMS生成的PMSH₂還原MTT生成紫色物質(zhì)，在570nm處有特征吸收峰。

技術指標：
低檢出限：0.0387 μmol/mL
線性范圍：0.039-1 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、研缽/勻漿器、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱、乙醇和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 
   

1. 
   

2. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

3. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取樣本。

4. 
   

實驗實例：

1. 取0.1g兔心加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后稀釋5倍，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.137-0.125=1.012，根據(jù)標準曲線y=0.7826x+0.0215，計算x=1.266，按樣本質(zhì)量計算含量得：

L-LA含量（μmol/g 質(zhì)量）=1.1875×x÷W×稀釋倍數(shù)= 1.1875×1.266÷0.1×5=75.17 μmol/g質(zhì)量。

1. 取100μL小鼠血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.152-0.407=0.745，根據(jù)標準曲線y=0.7826x+0.0215，x=0.924，按照液體體積計算含量得：

L-LA含量（μmol/mL）= 13.0625×x=13.0625×0.924=12.07 μmol/mL。
相關發(fā)表文獻：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al.Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease. March 2019;(IF5.959)

2. Xiaojin Luo,Weihua Shi，Haoming Yu,et al. Wearable Carbon Nanotube-Based BioSensors on Gloves for Lactate. Sensors. October 2018;(IF3.031)

3. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.

參考文獻：
[1] Jin Bingjun, Li Taiyuan, Zhang Chunfeng. Determination of lactic acid concentration in bovine blood by enzymatic method [J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 1990, 16(07): 23-25.  [2] Eolbergrová J, MacMillan V, Siesj? B K. The effect of moderate and marked hypercapnia upon the energy state and upon the cytoplasmic NADH/NAD⁺ ratio of the rat brain[J]. Journal of neurochemistry, 1972, 19(11): 2497-2505.
相關系列產(chǎn)品：
BC0740/BC0745 己糖激酶（HK）活性檢測試劑盒
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