高鐵螯合物還原酶（FCR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC5910

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 顯色液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一：試劑二：試劑三=250μL：250μL：250μL（750μL，1T）的比例配制顯色液，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入0.71mL蒸餾水和10μL濃硫酸，配制成50μmol/mL Fe²⁺標(biāo)準(zhǔn)液。溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品2-8℃可以保存2周。

3、 62.5nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：臨用前取50μL 50μmol/mL Fe²⁺標(biāo)準(zhǔn)液和950μL蒸餾水混合配制成2.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液；再吸取25μL 2.5μmol/mL（2500nmol/mL）和975μL蒸餾水混合配制成62.5nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

產(chǎn)品說(shuō)明：

雙子葉植物和非禾本科單子葉植物采用鐵螯合還原反應(yīng)的高效活化和吸收機(jī)制從土壤中獲取鐵。三價(jià)鐵還原為二價(jià)鐵后才能被植物吸收利用。在鐵充足時(shí)，植物根部的三價(jià)鐵氧化還原酶將Fe(III)-螯合物中的鐵還原并將還原所得Fe²⁺轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)入根細(xì)胞內(nèi)。

高鐵螯合物還原酶（Ferric chelate reductase，FCR，EC1.16.1.7）催化Fe³⁺還原為Fe²⁺，F(xiàn)e²⁺和菲洛嗪形成紫色絡(luò)合物，在562nm下有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、分析天平、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、濃硫酸（95%-99% AR）、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請(qǐng)見(jiàn)“產(chǎn)品資料"文件

注意事項(xiàng)：

1、 如果?A小于0.010或測(cè)定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量或者延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間后再進(jìn)行測(cè)定；如果?A大于1或者A1大于1，建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 稱(chēng)取0.1214g櫻桃番茄，加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.921-0.082=0.839，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.723-0.044=0.679，帶入公式計(jì)算：

FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=21.020 U/g 質(zhì)量

2、 稱(chēng)取0.1002g閩南葉片，加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.203-0.088=0.115，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.723-0.044=0.679，帶入公式計(jì)算：

FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=3.521U/g 質(zhì)量

參考文獻(xiàn)：

[1] Shabnam N , Kim M , Kim H .Iron (Ⅲ) oxide nanoparticles alleviate arsenic induced stunting in Vigna radiata[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 2019, 183(Nov.).

[2 Kabir A H , Akther M S , Skalicky M ,et al.Downregulation of Zn-transporters along with Fe and redox imbalance causes growth and photosynthetic disturbance in Zn-deficient tomato[J].Scientific Reports, 2021, 11(1).

[3] Ojeda M , Schaffer B , Davies F S .Root and Leaf Ferric Chelate Reductase Activity in Pond Apple and

Soursop[J].Journal of Plant Nutrition, 2005, 27(8):1381-1393.

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