尿素氮（BUN）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC1530

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，4℃可保存一周。

2、 試劑三：臨用前將A液倒入B液中混合，或者根據(jù)比例（A:B=1:4）現(xiàn)用現(xiàn)配。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg尿素。臨用前加入4.66 mL蒸餾水配制成1 mg/mL尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

尿素（BUN）是人體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，BUN構(gòu)成了血液中絕大部分的非蛋白質(zhì)氮，血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH₃-N，生成的藍(lán)色靛酚和尿素氮的濃度成正比。

技術(shù)指標(biāo)：

最檢出限：0.000086 μg/mL

線性范圍：0.390625-50 μg/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5-10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水），冰上勻漿后于4℃，12000g離心15min，取上清待測(cè)。

細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500-1000：1的比例（建議500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3s，間隔7s，總時(shí)間3min）；然后4℃，12000g離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。

血清（漿）或其它液體：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至630nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 將1mg/mL尿素氮標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至25μg/mL備用。

3. 加樣表：

三、計(jì)算公式

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算：

尿素氮含量（μg/g 質(zhì)量）=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷W=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

2. 按蛋白濃度計(jì)算：

尿素氮含量（μg/mg prot）=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷（Cpr×V提?。?/span>=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

3. 按細(xì)胞數(shù)計(jì)算：

尿素氮含量（μg/10⁴ cell）=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V提取÷細(xì)胞數(shù)量=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量

4. 按液體體積計(jì)算：

尿素氮含量（μg/mL）=ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品=25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，25μg/mL；V提?。禾崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細(xì)胞數(shù)量：以萬(wàn)計(jì)。

注意事項(xiàng)：

如果樣本吸光值大于1.3，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

[1] Xiaoguang Zhu,Jun Shi,Huicong li,et al. PVT1 knockdown alleviates vancomycin-induced acute kidney injury by targeting miR-124 via inactivation of NF-κB signaling. RSC advances. September 2018;(IF3.049)

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