土壤尿酸酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

微量法

貨號(hào)：BC4415

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、試劑一：自備甲苯；

2、試劑二：臨用前按照試劑二A液︰試劑二B液= 1︰35的比例混合，根據(jù)樣本量所需使用當(dāng)天現(xiàn)配現(xiàn)用；

3、標(biāo)準(zhǔn)品：5 µmol/mL的尿酸溶液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

土壤尿酸酶是一種與核酸代謝有關(guān)的氧化還原酶，主要是將土壤中的核酸腺嘌呤與尿酸等物質(zhì)轉(zhuǎn)化成 素和尿囊酸，進(jìn)而生成尿素供植物利用。

土壤尿酸酶能夠催化尿酸生成 素、CO₂和H₂O₂，尿酸在284 nm有特征吸收峰，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)前后尿酸的減少量，來(lái)表示土壤尿酸酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、研缽、可調(diào)式移液器、微量石英比色/96孔UV板、冰、30~50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

操作步驟：

一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。

二、測(cè)定步驟

1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至284 nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、將5 µmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水倍比稀釋為1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 µmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。

3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需60µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、加樣表：

充分混勻，吸取200 μL于微量石英比色皿/96孔UV板中測(cè)定284 nm處吸光值，記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A無(wú)土管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A空白管。計(jì)算ΔA=（A無(wú)土管-A空白管）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管）、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管，同一批次樣本檢測(cè)無(wú)土管、空白管只需檢測(cè)1-2管，標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測(cè)1-2次。

三、土壤尿酸酶活性計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。

2、 土壤尿酸酶活性的計(jì)算：

酶活定義：每天每g土樣中消耗1 μmol的尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。

土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）＝x×V反總÷W÷T=0.7625x÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，1 d = 24 h；V反總：反應(yīng)體系總體積：0.7625 mL；W：樣本質(zhì)量，g。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱取兩管2-1-20號(hào)土樣0.05g，按照操作步驟進(jìn)行操作，使用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=（A無(wú)土管-空白管）-（A測(cè)定管-A對(duì)照管）=（1.0928-0.0023）-（0.6852-0.0509）=0.4562，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.6894x + 0.0016，  計(jì)算x=0.2691，按照計(jì)算公式計(jì)算酶活得：

土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）=0.7625x÷W=0.7625×0.2691÷0.05=4.1 U/g 土樣。

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