葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
貨號(hào): BC3325
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前用4 mL蒸餾水溶解備用。

2. 試劑四：臨用前用4 mL蒸餾水溶解備用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL磷標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前用蒸餾水稀釋16倍至0.625 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

4. 工作液的配制：試劑二中加入5 mL試劑一充分溶解備用?？梢詫⒐ぷ饕悍盅b后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

5. 定磷試劑的配制：按H₂O:試劑三:試劑四:試劑五（V:V:V:V）=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說(shuō)明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一種水解磷酸化合物的磷酸酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是糖異生過(guò)程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無(wú)機(jī)磷，利用鉬藍(lán)法測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

1. 建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 若A大于1.5或者顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將上清液或者粗酶液用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

3. 定磷試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍(lán)則均為失效。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得A測(cè)定管=0.254、A對(duì)照管=0.171、A空白管=0.047、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.357，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.254-0.171=0.083，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：G6P（U/g 質(zhì)量）=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=312.5×0.083÷0.31÷0.1=836.6935 U/g 質(zhì)量。

2. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得A測(cè)定管=0.995、A對(duì)照管=0.384、A空白管=0.047、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.357，計(jì)算△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.995-0.384=0.611，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：G6P（U/g 質(zhì)量）=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=312.5×0.611÷0.31÷0.1=6159.274 U/g 質(zhì)量。

3. 取0.1g小鼠血清稀釋2倍，直接檢測(cè)，用96孔板測(cè)得A測(cè)定管=0.38、A對(duì)照管=0.199、A空白管=0.047、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.357，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.38-0.199=0.181，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.357-0.047=0.31，按血清計(jì)算酶活得：G6P（U/mL）=312.5×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×稀釋倍數(shù)=312.5×0.181÷0.31×2=364.9194 U/mL。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Fan X, Hou T, Jia J, et al. Discrepant dose responses of bisphenol A on oxidative stress and DNA methylation in grass carp ovary cells[J]. Chemosphere, 2020, 248: 126110.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0730/BC0735  丙 酮酸羧化酶（PC）活性檢測(cè)試劑盒
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