品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC0555 |
規(guī)格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
微量
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號:BC0555
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1. 試劑一:臨用前取一支加入1 mL試劑三,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存2周,禁止反復(fù)凍融。
2. 試劑二:臨用前取一支加入1 mL試劑三,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存2周,禁止反復(fù)凍融。
3. 試劑四:臨用前取一支加入0.5 mL試劑三,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存2周,禁止反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明:
脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase,FAS)是一種關(guān)于脂肪酸再生能力并起重要作用的限速酶,它通過催化丙二酰輔*A、乙酰輔*A和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+,NADPH在340nm條件下有特征吸收峰。通過檢測340nm條件下吸光值的下降速率,可以計(jì)算出FAS活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器/超聲波細(xì)胞破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、細(xì)菌、細(xì)胞樣本的制備:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)): 提取液體積(mL)為500~1000 : 1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300W,超聲3秒,間隔9秒,總時(shí)間5 min);于4℃,
12000 g離心20 min,取上清液,置于冰上待測。
2、組織樣本的制備:按照質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)為1: 5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1mL
提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000 g離心20 min,取上清液,置于冰上待測。
3、血清(漿)等液體樣本:直接測定
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑三臨用前置于37℃保溫15min。
3、 加樣表(在96孔UV板或者微量石英比色皿中加入下列試劑)
三、FAS活性計(jì)算
a. 使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/mg prot) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109] ÷(Cpr×V樣)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每克組織每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/g 質(zhì)量) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1 nmol NADPH 為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/104 cell) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(N×V樣÷V樣總)÷T=1607.7×ΔA ÷N
(4)按液體體積計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每毫升樣本每分鐘氧化1 nmol NADPH為 1個(gè)酶活單位。
FAS (U/mL) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=1607.7×ΔA
ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20 μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;N:細(xì)胞數(shù)量,萬個(gè)(以萬計(jì));109:換算系數(shù),1mol=109 nmol。
b. 使用96孔UV板測定的計(jì)算公式
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/mg prot) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109] ÷(Cpr×V樣)÷T=2679.5×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每克組織每分鐘氧化1 nmol NADPH為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/g 質(zhì)量) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=2679.5×ΔA ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1 nmol NADPH 為1個(gè)酶活單位。
FAS (U/104 cell) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷(N×V樣÷V樣總)÷T=2679.5×ΔA ÷N
(4)按液體體積計(jì)算
單位定義:在37℃條件下,每毫升樣本每分鐘氧化1 nmol NADPH為 1個(gè)酶活單位。
FAS (U/mL) =[ΔA÷(ε×d)×V反總×109]÷V樣÷T=2679.5×ΔA
ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:96孔板,0.6 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200 μL=2×10-4L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20 μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;N:細(xì)胞數(shù)量,萬個(gè)(以萬計(jì));109:換算系數(shù),1mol=109nmol。
注意事項(xiàng):
1、提取液中含有BSA(約2mg/mL),測定上清液蛋白濃度時(shí)需要減去提取液中蛋白濃度。
2、如果測定吸光值>1.5或ΔA>0.5,建議用蒸餾水稀釋樣本后再進(jìn)行測定,計(jì)算公式中乘稀釋倍數(shù)。如果測定吸光值較小,建議加大樣本量后再進(jìn)行測定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。12000 g 4℃離心20 min,取上清置冰上,之后用石英微量比色皿按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA =(A1測定-A2測定)-(A1空白-A2空白)= (1.1783-1.0945)-(0.5653-0.5593)=0.0778,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
FAS(U/g 質(zhì)量) =1607.7×ΔA ÷W=1251 U/g質(zhì)量。
參考文獻(xiàn):
[1] Robinson J D, Bradley R M, Brady R O. Biosynthesis of Fatty Acids[J]. Journal of Biological Chemistry, 1960, 238(2).
[2] Tcl B. Purification and crystallization of rat liver fatty acid synthetase[J]. Archives of Biochemistry & Biophysics, 1981, 209(2):613-619.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2340/BC2345 脂肪酶(LPS)活性檢測試劑盒
BC1080/BC1085 乙醇脫氫酶(ADH)活性檢測試劑盒
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脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒 微量法 脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒 微量法