草酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

貨號(hào): BC4365

規(guī)格:100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加入3mL蒸餾水溶解后待用；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入792µL蒸餾水配制成100 µmol/mL草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；

產(chǎn)品說(shuō)明：

草酸是一種二元羧酸，廣泛存在于植物界中，且在不同領(lǐng)域有著不同的作用：在醫(yī)藥、印染、塑料等工業(yè)生產(chǎn)中，草酸可用作制藥原料、絡(luò)合劑、漂白劑、沉淀劑以及還原劑等；從食品角度看，長(zhǎng)期食用草酸含量高的蔬菜，容易引發(fā)關(guān)節(jié)炎、低血鈣、膀胱結(jié)石和腎結(jié)石等疾病，而被認(rèn)為是礦物元素的拮抗物。

Fe³⁺在pH為2的條件下可以與磺基水楊酸生成紫色絡(luò)合物，在510 nm處有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使Fe³⁺與磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺，且Fe³⁺與磺基水楊酸絡(luò)合物的吸光度隨著草酸量的增加而降低，據(jù)此可由降低的吸光值計(jì)算出樣本中草酸的含量。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.1601 μmol/mL

線性范圍：0.1875-18 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

組織：按照質(zhì)量（g）:蒸餾水體積（mL）為1:5~10的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL蒸餾水）充分勻漿，然后加入少許試劑四（約3-5mg），震蕩混勻后置于75℃水浴鍋脫色30 min，期間搖晃2-3次，脫色后常溫3000r/min離心15 min，取上清置于冰上待測(cè)（若組織沉淀與試劑四不能一次性離心去除時(shí)，建議將上清多離心幾次；若一

次脫色不全時(shí)，建議重復(fù)脫色至溶液呈無(wú)色或略呈乳白色）。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將100 µmol/mL的草酸標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為18、15、12、6、3、1.5、0.75、0.375 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 操作表 (在1.5 mL離心管/96孔板中操作) ：

注意：如果檢測(cè)樣本量大，可以根據(jù)樣本所需按照試劑一:試劑二:試劑三=2:15:1（v:v:v）的比例配制成工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，加樣體系為180 µL工作液，20 µL樣本（蒸餾水或標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

三、草酸含量計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b，將ΔA帶入方程得到x（µmol/mL）。

2、 草酸含量的計(jì)算：

草酸含量（mg/g質(zhì)量）= x×V提取×M×10^-3÷W=0.09x÷W

V提取：加入的蒸餾水體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；M：草酸分子質(zhì)量90.04；10^-3：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1 µg=10^-3 mg。

注意事項(xiàng)：

1. 如果測(cè)定吸光值超過(guò)線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

2. 如將試劑一、試劑二與試劑三配成工作液使用時(shí)，按照配制比例根據(jù)樣本量所需現(xiàn)配現(xiàn)用，不得一次性配完待用。

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