組織鐵含量檢測(cè)試劑盒說明書

微量法

貨號(hào)：BC4355

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前配制，取1瓶加入5 mL蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用，2-8℃保存一周；

2、 試劑二：臨用前配制，取1瓶加入235 μL冰醋 酸，加入7.5 mL蒸餾水充分溶解；溶解后2-8℃保存一周；

3、 標(biāo)準(zhǔn)液：1 μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液。

4、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：臨用前取100μL 1 μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液，加入700μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要120μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）

產(chǎn)品說明：

鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸，促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機(jī)體的免疫功能。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.00206 μmol/mL

線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、氯仿、冰乙酸、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。4000g 4℃離心10分鐘，取上清。

二、測(cè)定步驟

1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至520nm。蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表：

三、組織鐵含量計(jì)算

1．按組織質(zhì)量計(jì)算：

組織鐵含量（μg/g 質(zhì)量）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷W= 6.98×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

2．按組織蛋白濃度計(jì)算

組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）

= 6.98×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.125μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提取：提取液體積，1mL；55.845：Fe的相對(duì)分子質(zhì)量，55.845μg/μmol。

注意事項(xiàng)：

1、 當(dāng)ΔA大于0.6 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測(cè)定；ΔA過小時(shí)，可增加加入的樣本體積來測(cè)定。

2、 試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護(hù)措施。

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