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  • 亞鐵氧化酶(HP)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
產(chǎn)品名稱:

亞鐵氧化酶(HP)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
儲(chǔ)存條件
2-8℃
中文名稱
亞鐵氧化酶(HP)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
有效期
6個(gè)月
單位

英文名稱
Hephaestin(HP) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號(hào)BC4345
規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途亞鐵氧化酶(HP)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

亞鐵氧化酶(HP)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

貨號(hào):BC4345

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

試劑一

液體20 mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體3 mL×1

2-8℃保存

試劑三

粉劑×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、試劑三:臨用前加入6 mL蒸餾水溶解備用,用不完的試劑2-8℃保存4周。

2、標(biāo)準(zhǔn)品:9 µmol/mL的亞鐵離子標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明:

亞鐵氧化酶(Hsphasetin,HP)是銅藍(lán)蛋白的同系物,催化亞鐵離子(Fe2+)氧化為三價(jià)鐵離子(Fe3+),從而三價(jià)鐵與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合,參與細(xì)胞鐵釋放。

以一定濃度的Fe2+ 為底物,在亞鐵氧化酶的催化作用下Fe2+ 被氧化為Fe3+,Fe2+ 與菲咯嗪形成有色復(fù)合物,在562 nm處有特征吸收峰,先計(jì)算出未被氧化的Fe2+ 的含量,進(jìn)而得出被氧化的Fe2+ 的含量,可通過(guò)Fe2+被氧化的速率來(lái)反映亞鐵氧化酶活性。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、組織:按照質(zhì)量(g蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g,加入1 mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于10000 rpm,4℃離心10 min,取上清置于冰上待測(cè)。

2、血清或血漿:建議用蒸餾水將血清或血漿稀釋2~4倍后直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心取上清置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至562 nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:9µmol/mL的亞鐵離子標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水倍比稀釋為360、18090、45、22.511.25、5.625 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

 

3、 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表:

序號(hào)

稀釋前濃度(nmol/mL

標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

蒸餾水體積(µL

稀釋后濃度(nmol/mL

1

9000

40

960

360

2

360

500

500

180

3

180

500

500

90

4

90

500

500

45

5

45

500

500

22.5

6

22.5

500

500

11.25

7

11.25

500

500

5.625

備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 操作表:1.5 mL離心管(分光光度計(jì))或96孔板中依次加入下列試劑:

試劑名稱

對(duì)照管

測(cè)定管

無(wú)基質(zhì)管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

蒸餾水(µL

-

-

8

8

8

樣本(µL

8

8

-

-

-

試劑一(µL

112

112

112

112

112

用移液槍充分吹打混勻

試劑二(µL

-

40

40

-

-

標(biāo)準(zhǔn)溶液(µL

-

-

-

-

40

蒸餾水(µL

40

-

-

40

-

混勻,37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)3 min

試劑三(µL

40

40

40

40

40

混勻,于微量玻璃比色皿/96孔板中測(cè)定562 nm處吸光值A,分別記為A對(duì)照管,A測(cè)定管、A無(wú)基質(zhì)管、A空白管和A標(biāo)準(zhǔn)管。計(jì)算ΔA測(cè)定=A無(wú)基質(zhì)管-A空白管)-A測(cè)定管-A對(duì)照管),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管,同一批次無(wú)基質(zhì)管、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2。

三、亞鐵氧化酶活性計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(nmol/mL)為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y= kx+b,將ΔA測(cè)定帶入方程得到樣本濃度(x,nmol/mL)。

2、 亞鐵氧化酶活性的計(jì)算:

1)按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每mg蛋白每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活(U/mg prot= x×V試劑二÷V×Cpr÷T ×N= 1.667x÷Cpr×N

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每g樣品每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活(U/g鮮重)= x×V試劑二÷V×W÷V提?。?/span>÷T×N = 1.667x÷W×N

3)按液體體積計(jì)算

酶活定義:每mL樣本每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個(gè)酶活力單位。

亞鐵氧化酶酶活(U/mL= x×V試劑二÷V÷T×N = 1.667x×N

V試劑二:加入的試劑二體積,0.04 mL;V樣:加入的樣本體積,0.008 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間:3 min;N:稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng):

1. 當(dāng)A測(cè)定低于0.1時(shí),建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

1、 0.1g結(jié)腸,進(jìn)行樣本處理,按照測(cè)定操作步驟,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定 =A無(wú)基質(zhì)管-A空白管)-A測(cè)定管-A對(duì)照管)=1.144-0.041-1.114-0.048=0.037,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.0031x - 0.0007,計(jì)算x=11.710,按照樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

亞鐵氧化酶酶活(U/g質(zhì)量)= 1.667×x÷W×N= 1.667×11.710÷0.1=195.161 U/g質(zhì)量。

2、 取兔血清,按照測(cè)定操作步驟,測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A無(wú)基質(zhì)管-A空白管)-A測(cè)定管-A對(duì)照管)=0.577-0.048-1.114-0.048=0.574,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y = 0.0031x - 0.0007,計(jì)算x=184.935,按照液體體積計(jì)算酶活得:

亞鐵氧化酶酶活(U/mL= 1.667×x=1.667×184.935=308.287 U/mL

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC1300/BC1305 銅藍(lán)蛋白(Cp)活性檢測(cè)試劑盒

BC1310/BC1315 總抗氧化能力(T-AOC)檢測(cè)試劑盒

BC4430/BC4435 尿酸酶活性檢測(cè)試劑盒

BC1360/BC1365 尿酸(UA)含量檢測(cè)試劑盒

BC1320/BC1325 羥自由基清除能力檢測(cè)試劑盒

 

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