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  • 脂蛋白酯酶(LPL)檢測試劑盒 微量法
產(chǎn)品名稱:

脂蛋白酯酶(LPL)檢測試劑盒 微量法

產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-16
儲存條件
2-8℃
脂蛋白酯酶(LPL)檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
單位

英文名稱
Lipoprteinlipase(LPL) Activity Assay Kit
別名
脂蛋白酯酶試劑盒 LPL Kit 脂蛋白酯酶(LPL)試劑盒 脂蛋白酯酶(LPL)測試盒
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S
自備試劑

產(chǎn)品概述

品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
分子式詳詢純度詳詢
分子量詳詢貨號BC2445
規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
主要用途測定意義:脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

脂蛋白酯酶(LPL)活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號:BC2445

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

試劑一

液體80 mL×1

2-8保存

試劑二

粉劑×1

2-8保存

試劑三

液體20 mL×1

2-8保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1 mL×1

2-8保存

溶液的配制:

1. 試劑二:臨用加入1mL丙酮溶解備用,用不完的試劑-20℃保存4周。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品:5 μmol/mL對硝基苯*標(biāo)準(zhǔn)溶液。臨用前取30μL 5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,加入450μL試劑一,充分混勻,配制成0.3125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配(實(shí)驗(yàn)中每管需要30μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積)。

產(chǎn)品說明:

脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三酯水解為脂肪酸和單酸甘油酯,主要在肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成,在脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮重要作用。

脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯*,在400nm有特征吸收峰。

 

 

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫臺式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、EP管、冰、丙酮和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣本:直接檢測。

 

二、測定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表:1.5mL EP管中進(jìn)行下列操作:

樣本名稱

對照管

測定管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本(μL

30

30

-

-

標(biāo)準(zhǔn)管(μL

-

-

30

-

蒸餾水(μL

-

-

-

30

試劑一(μL

120

108

120

120

試劑二(μL

-

12

-

-

混勻,45水浴10min

-

-

試劑三(μL

150

150

150

150

充分混勻放置2min后,對照管和測定管8000g常溫離心10min,取200μL對照管和測定管的上清、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管于微量玻璃比色皿/96孔板中測定400nm處吸光值,記為A對照管、A測定管、A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管,ΔA=A測定管- A對照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

三、LPL活性計(jì)算

1、血清(漿)LPL活力計(jì)算

單位定義:在45,pH7.5條件下,每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基苯*為一個酶活力單位。

LPLU/mL=ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))÷T×1000=31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LPL活力計(jì)算

1)按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義:在45,pH7.5條件下,每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基苯*為一個酶活力單位。

LPLU/g 質(zhì)量)=ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

2)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:在45pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基苯*為一個酶活力單位。

LPLU/mg prot=ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V提取÷V提取×Cpr÷T×1000=31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

單位定義:在45,pH7.5條件下,每104個細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1nmol 4-硝基苯*為一個酶活力單位。

LPLU/104 cell=ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.3125μmol/mL;V提取:加入試劑一體積,1mL;T:反應(yīng)時間,10min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),以萬計(jì)1000:單位換算系數(shù),1μmol=1000nmol。

注意事項(xiàng)

1、 測定管加入試劑二后混變渾濁為正?,F(xiàn)象。

2、 A大于2,將粗酶液用試劑一稀釋后再進(jìn)行測定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

1、 0.1g大鼠肌肉加入1mL試劑一,取上清后按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算ΔA=A測定管- A對照管=0.367-0.128=0.239,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.378-0.046=0.332,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

LPLU/g 質(zhì)量)= 31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=31.25×0.239÷0.332÷0.1=224.96 U/g 質(zhì)量。

2、 取兔血清直接按照測定步驟操作,96孔板測得計(jì)算ΔA=A測定管- A對照管=0.750-0.152=0.598ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.378-0.046=0.332,按血清(漿)體積計(jì)算酶活得:

LPLU/mL=31.25×ΔΔA標(biāo)準(zhǔn)=31.25×0.598÷0.332=56.29 U/mL

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC0590/BC0595  游離脂肪酸(FFA)含量檢測試劑盒

BC1080/BC1085  乙醇脫氫酶(ADH)活性檢測試劑盒

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脂蛋白酯酶(LPL)檢測試劑盒 微量法

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