品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號(hào) | BC4275 |
規(guī)格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 支鏈淀粉含量檢測(cè) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體100 mL×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體55 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | - | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑六 | 液體10mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二:*100 mL自備。
試劑四:提供125 mL空瓶一個(gè);將試劑三:H2O =9 mL:91 mL混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配,2-8℃保存半年。
標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg支鏈淀粉。臨用前加入0.1 mL無水乙醇和0.9 mL試劑三,混勻后封口膜封口,沸水浴至溶解,即10 mg/mL的支鏈淀粉,2-8℃保存半年。
稱取0.005g烘干樣本,加入1mL試劑一,充分勻漿;
80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀;
在步驟2沉淀中加入1mL試劑二(*)振蕩 5min;3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀;
在步驟3沉淀中加入5mL試劑四充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后3000g,25℃離心5min,取上清待測(cè)。
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)雙波長(zhǎng)至530nm和755nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用試劑四稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表:
序號(hào) | 稀釋前濃度(mg/mL) | 標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL) | 試劑四體積(µL) | 稀釋后濃度(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
4 | 1 | 160 | 240 | 0.4 |
5 | 0.4 | 200 | 200 | 0.2 |
6 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
7 | 0.1 | 200 | 200 | 0.05 |
操作表:(在1.5mL離心管中或96孔板中依次加入下列試劑)
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本(µL) | 40 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL) | - | 40 | - |
蒸餾水(µL) | - | - | 40 |
試劑五(µL) | 15 | 15 | 15 |
試劑六(µL) | 10 | 10 | 10 |
蒸餾水(µL) | 135 | 135 | 135 |
充分混勻,測(cè)定530nm和755nm處的吸光值,530nm下的測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管分別記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,755nm下的分別記為A’測(cè)定、A’標(biāo)準(zhǔn)、A’空白,計(jì)算ΔA測(cè)定=(A測(cè)定-A空白)-(A’測(cè)定-A’空白),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)-(A’標(biāo)準(zhǔn)-A’空白)。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測(cè)定1-2次。 |
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
支鏈淀粉含量(mg/g 質(zhì)量)=x×V樣總÷W=5x÷W
反應(yīng)后建議在20min內(nèi)檢測(cè)完成防止褪色。
如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
取0.01g大米于研缽中研碎,加入1mL試劑一,進(jìn)行樣本處理,取上清3倍稀釋后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=(A測(cè)定-A空白)-(A’測(cè)定-A’空白)=(0.351-0.059)-(0.190-0.048)=0.150,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.5157x+0.0089計(jì)算x=0.2736,按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得:
支鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒 微量法 支鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒 微量法