土壤芳基硫酸酯酶（S-ASF）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC3990

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：甲苯自備；

2、 試劑三：臨用前取1瓶加入10mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存一周，避免反復(fù)凍融；

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：5mmol/L的對(duì)硝基苯*溶液。臨用前用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。（具體稀釋過(guò)程見(jiàn)操作步驟）

產(chǎn)品說(shuō)明：

土壤芳基硫酸酯酶來(lái)自于土壤微生物，能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無(wú)機(jī)態(tài)硫，在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營(yíng)養(yǎng)代謝中具有重要的作用，是反映土壤質(zhì)量的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。

S-ASF能夠催化對(duì)-硝基苯硫酸鉀生成對(duì)-硝基苯*，后者在410nm有特征光吸收。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽、冰、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長(zhǎng)調(diào)至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取20μL 5mmol/L的對(duì)硝基苯*溶液，加入980μL試劑二，充分混勻，配制成100μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液待測(cè)，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要500μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）

3、 加樣表：

充分混勻，常溫靜置2min后，吸取1mL反應(yīng)液于1mL玻璃比色皿中，測(cè)定吸光值A，分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA測(cè)定=A 測(cè)定管-A對(duì)照管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需檢測(cè)1-2次。

三、S-ASF活力計(jì)算

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol對(duì)-硝基苯*定義為一個(gè)酶活力單位。

S-ASF活力（U/g 土樣）=ΔA測(cè)定÷ (ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V反總÷W÷T=2.28×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V反總：反應(yīng)體系總體積：9.5×10^-4L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100μmol/L；W：樣本質(zhì)量，g。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 分別稱取兩管0.1g三葉草土樣，分別記為測(cè)定管和對(duì)照管，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.627-0.108=0.519，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計(jì)算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2.28×0.519÷0.566÷0.1=20.9067 U/g 土樣。

2、 分別稱取兩管0.1g土樣，分別記為測(cè)定管和對(duì)照管，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.442-0.102=0.34，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.568-0.002=0.566，計(jì)算酶活得：

S-ASF活力（U/g 土樣） =0.456×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2.28×0.34÷0.566÷0.1=13.69611 U/g 土樣。

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