試劑二：臨用前加入15 mL試劑一充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存兩周。

標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg無(wú)水*萄糖。臨用前加入1 mL試劑一溶解，制備10 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液備用，2-8℃保存兩周。

如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現(xiàn)，建議離心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清測(cè)定吸光度；

如果吸光值大于1，可以用試劑一將上清液稀釋后測(cè)定（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）；若吸光值較小，可以增加上清液體積或者土樣質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定。

取兩管0.1g林土，測(cè)定管加入試劑二800μL、甲苯20μL，對(duì)照管加入試劑一800μL、甲苯20μL，37℃準(zhǔn)確水浴1h后，煮沸10min，離心取上清稀釋5倍，之后按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.191-0.074=0.117，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=5.1864x-0.1698，x=0.055，計(jì)算酶活得：S-NI（U/g 土樣）=19.2×x÷W×5（稀釋倍數(shù)）=19.2×0.055÷0.1×5（稀釋倍數(shù)）=52.8 U/g 土樣。

取兩管0.1g土樣，測(cè)定管加入試劑二800μL、甲苯20μL，對(duì)照管加入試劑一800μL、甲苯20μL，37℃準(zhǔn)確水浴1h后，煮沸10min，離心取上清稀釋5倍，之后按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.161-0.086=0.075，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=5.1864x-0.1698，x=0.047，計(jì)算酶活得：S-NI（U/g 土樣）=19.2×x÷W×5（稀釋倍數(shù)）=19.2×0.047÷0.1×5（稀釋倍數(shù)）=45.12 U/g 土樣。