α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC2555
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑一：臨用前取1瓶加入6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑建議-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；
2、標(biāo)準(zhǔn)品：5 μmol/mL的對*溶液。
產(chǎn)品說明：
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān)，而且與細(xì)胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。
α-GC分解對-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-*，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每1000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：稱取約0.2g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
3、液體樣本：直接檢測。若溶液有渾濁需離心后取上清進(jìn)行測定。
二、測定步驟

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：將5μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋成100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

3. 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需70µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1. 加樣表

參考文獻(xiàn)：
[1] Wang S Y, Camp M J, Ehlenfeldt M K. Antioxidant capacity and α-glucosidase inhibitory activity in peel and flesh of blueberry (Vaccinium spp.) cult ivars[J]. Food Chemistry, 2012, 132(4): 1759-1768.
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