品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號(hào) | BC1035 |
規(guī)格 | 100T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 測(cè)定原理: NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
NAD激酶(NADK)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào):BC1035
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑五 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑六 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑七 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑八 | 液體14 μL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑九 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑十 | 液體40 mL×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑三:用時(shí)加入3 mL雙蒸水,充分溶解,可分裝保存,-20℃保存兩周,禁止反復(fù)凍融;臨用前取出一支稀釋100倍使用。
試劑四:用時(shí)加入1 mL雙蒸水,充分溶解,2-8℃保存;
試劑五:用時(shí)加入2 mL雙蒸水,充分溶解,2-8℃保存;
試劑六:用時(shí)加入2 mL雙蒸水,充分溶解,2-8℃保存;
試劑七:用時(shí)加入2 mL雙蒸水,充分溶解,2-8℃避光保存;
試劑八:液體置于試劑瓶?jī)?nèi)EP管中。臨用前加入0.986 mL蒸餾水充分溶解,可分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑十:自備95%乙醇;
標(biāo)準(zhǔn)品:加入1.9 mL蒸餾水,即得2 μmol/mL NADP標(biāo)品。臨用前稀釋100倍得20 nmol/mL NADP標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說(shuō)明:
NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚 磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過其在570nm的吸光值大小可反映出NADK活性的大小。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無(wú)水乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng):
樣本的處理必須在0℃-4℃中操作完成,以防止酶變性失活。建議在正式實(shí)驗(yàn)前,選取差別較大的兩個(gè)樣本進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。
試劑三、四、五、六、七、八在測(cè)定過程中都必須在冰上放置。
當(dāng)初始吸光值大于0.4時(shí),建議將樣本用PBS稀釋后測(cè)量。
若測(cè)量樣本數(shù)量過多,可以將試劑二、五、六、七按比例配成工作液使用。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取0.1大鼠腎臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得A測(cè)定=0.260,A對(duì)照=0.125,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.260-0.125=0.135,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0994x-0.0429,計(jì)算x=(0.135+0.0429)/0.0994=1.7897,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
NADK(U/g 質(zhì)量)=0.067×x÷W×稀釋倍數(shù)= 0.067×1.7897÷0.1×2=2.3982 U/g 質(zhì)量。
取小鼠血漿稀釋2倍直接檢測(cè),使用96孔板測(cè)得A測(cè)定=0.093,A對(duì)照=0.076,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.093-0.076=0.017,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0994x-0.0429,計(jì)算x=(0.017+0.0429)/0.0994=0.6026,按血漿體積計(jì)算酶活得:
NADK(U/mL)=0.067×x×稀釋倍數(shù)=0.067×0.6026×2=0.0808 U/mL。
參考文獻(xiàn):
Pollak N, Niere M, Ziegler M. NAD kinase levels control the NADPH concentration in human cells[J]. Journal of Biological Chemistry, 2007, 282(46): 33562-33571.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0310/BC0315 輔酶Ⅰ NAD(H)含量檢測(cè)試劑盒
BC1040/BC1045 NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)活性檢測(cè)試劑盒
BC1050/BC1055 NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)活性檢測(cè)試劑盒
BC0630/BC0635 NADH氧化酶(NOX)活性檢測(cè)試劑盒
NAD激酶(NADK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 NAD激酶(NADK)活性檢測(cè)試劑盒 微量法