品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC1055 |
規(guī)格 | 100T/96S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 測定意義:MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
NADP-蘋
果酸脫氫酶(NADP-MDH)活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC1055
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前加入500 μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:臨用前加入600 μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存。
產(chǎn)品說明:
MDH(EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物,連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、微量石英比色皿/ 96孔板(UV板)、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項:
樣本的提取必須在0℃-4℃中操做完成,以防止酶變性失活。
實驗時,試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑一37℃放置。
建議一人加樣一人比色。因時間監(jiān)測范圍小,不推薦用96孔UV板同時測多個樣本。
用分光光度計時,當(dāng)初始值小于0.7或者ΔA大于0.5時,建議稀釋后測量。
實驗實例:
取0.1g心臟組織加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.7173-0.6399=0.0774,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.6583-0.6562=0.0021,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0753,按樣本質(zhì)量計算酶活得:
NADP-MDH(U/g 質(zhì)量)=6430×ΔA÷W=6430×0.0753 ÷0.1=4841.79 U/g 質(zhì)量。
取5μL血清直接按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定= 0.6934-0.6854=0.008,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.6583-0.6562=0.0021,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0059,按血清/血漿體積計算酶活得:
NADP-MDH(U/mL)=6430×ΔA=6430×0.0059=37.937 U/mL。
參考文獻(xiàn):
Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
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