品牌 | SOLARBIO/索萊寶 |
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豬骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào):P5120
規(guī)格:200ml/kit
保存:室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。
試劑盒內(nèi)容:
全血及組織稀釋液 100ml
細(xì)胞洗滌液 100ml
試劑C 100ml
試劑E 100ml
試劑F 100ml
說(shuō)明書(shū) 1 份
一、 各種動(dòng)物骨髓細(xì)胞的采集方法
1. 大鼠、小鼠骨髓的采集:用頸椎脫臼法處死動(dòng)物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的F 液,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘,棄上清。沉淀以F 液重復(fù)洗滌一次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起(細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml),備用。
2. 大動(dòng)物骨髓的采集:
A.骨髓穿刺點(diǎn)定位
(1)胸骨:穿刺部位在胸骨中線,胸骨體與胸骨柄連接處,或選胸骨上1/3 部。
(2)脛骨:穿刺部位在脛骨內(nèi)側(cè),脛骨上端的下方1 厘米處。
(3)肋骨:穿刺部位在第5~7 肋骨各自的中點(diǎn)上。
(4)髁骨:穿刺部位在髁前上棘后2~3 厘米的髁嵴。
(5)股骨:穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處。
B.骨髓穿刺方法
(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按要求固定,穿刺部位去毛、消毒、麻醉,要求局部麻醉范圍直達(dá)骨膜,也可作全麻。
(2)操作人員帶消毒手套,確定穿刺點(diǎn),估計(jì)從皮膚到骨髓的距離并依此固定骨髓穿刺針長(zhǎng)度。左手拇、食指繃緊穿刺點(diǎn)周?chē)つw,右手持穿刺針在穿刺點(diǎn)垂直進(jìn)針,小弧度左右旋轉(zhuǎn)鉆入,當(dāng)有落空感時(shí)表示針尖已進(jìn)入骨髓腔。用左手固定穿刺針,右手抽出針芯,連接注射器緩慢抽吸骨髓組織,當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時(shí)立即停止抽吸,收集骨髓細(xì)胞加入4-5ml F 液混勻,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘,棄上清,沉淀以F 液重復(fù)洗滌兩次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起(細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml),備用。
(3)左手壓住穿刺點(diǎn)周?chē)つw,迅速拔出穿刺針,用棉球壓迫數(shù)分鐘。如穿刺的是肋骨,除壓迫止血外,還需膠布封貼穿刺點(diǎn),防止發(fā)生氣胸。
3. 人骨髓的采集:
臨床方法收集骨髓細(xì)胞加入4-5ml F液混勻,以500g(約1800轉(zhuǎn)/分)離心20分鐘,棄上清,沉淀以F液重復(fù)洗滌兩次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起(細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個(gè)/ml),備用。
二、骨髓淋巴細(xì)胞分離方法
1.取1ml 骨髓細(xì)胞懸液與E液按1:1比例混合再與1份全血及組織稀釋液混勻置20℃-30℃下自然沉降20-30分鐘。吸取渾濁的上清部分,棄去底部紅細(xì)胞備用。
2. 取渾濁的上清部分液體小心疊加在C 液之液面上(比例為1:1),20℃±2℃,400g(約1500 轉(zhuǎn)/分),離心20 分鐘(半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子)。
此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層;為稀釋液層。第二層;為環(huán)狀乳白色含所需單個(gè)核細(xì)胞層。
第三層;為透明分離液層。第四層;為極少紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含細(xì)胞洗滌液4-5 毫升的試管中,充分混勻后,以500g(約1800 轉(zhuǎn)/分)離心20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌2 次即得所需單個(gè)核細(xì)胞。
注: 提取率約為80%。
分離圖例:
三、 注意事項(xiàng)
A. 本分離液是敏光型的,在運(yùn)輸和貯藏過(guò)程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存,啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
B. 待分離的骨髓要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時(shí)分離效果好,且所有操作過(guò)程一定要在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
C. 由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶(hù)可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時(shí)間,摸索的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。
D. 好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。
四、產(chǎn)品性能指標(biāo)
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無(wú)菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下
五、貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,有效期一周。
注:若保證無(wú)微生物污染,啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
豬骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運(yùn)輸說(shuō)明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。