品牌 | SOLARBIO/索萊寶 | CAS | 詳詢 |
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分子式 | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
分子量 | 詳詢 | 貨號 | BC1275 |
規(guī)格 | 100T/48S | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 測定意義:蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志,其含量高低表 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試
劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC1275
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑0.1g ×5支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體18 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體90mL×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
試劑六 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑一:使用前根據(jù)樣本數(shù),每支加1mL水震蕩溶解后離心取上清使用,每支為10個樣本用量,溶液變黑后即不可再繼續(xù)使用。
試劑五:自備乙酸乙酯和無水乙醇,根據(jù)測定樣本量,將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。(提供1個60mL空瓶)
產(chǎn)品說明:
蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉(zhuǎn)變成醛基,并釋放NH3+的過程.其在體內(nèi)的形成主要是通過金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
羰基與2,4--*反應(yīng)生成2,4-*腙,在370nm處有特征吸收峰。
Protein Carbonyl + 2, 4-Dinitrophenylhydrazine 2, 4-Dinitrobenzene (370nm)
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
天平、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、低溫離心機、超聲細胞破碎儀、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水、無水乙醇、乙酸乙酯。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項:
1. 試劑一使用前根據(jù)要測定的樣本數(shù)現(xiàn)配,配置好后4℃保存,若變?yōu)楹谏瑒t不能使用。
實驗實例:
取0.1g小鼠心臟加入1mL提取液充分勻漿后于4℃,5000rpm離心10min,取上清,加入0.1mL試劑一,室溫放置10min,4℃,12000rpm離心10min,取上清,按照測定步驟操作,用96孔UV板測得A370測定管=0.723,A370對照管=0.609,按樣本質(zhì)量計算酶活得:
蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/g質(zhì)量)=(A370測定管-A370對照管)÷9.6÷W=0.1188 μmol/g質(zhì)量。
取0.1g國槐加入1mL提取液充分勻漿后于4℃,5000rpm離心10min,取上清,加入0.1mL試劑一,室溫放置10min,4℃,12000rpm離心10min,取上清,按照測定步驟操作,用96孔UV板測得A370測定管=0.127,A370對照管=0.071,按樣本質(zhì)量計算酶活得:
蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/g質(zhì)量)=(A370測定管-A370對照管)÷9.6÷W=0.0583 μmol/g質(zhì)量。
取胎牛血清樣本按照說明步驟操作,直接測定,用96孔UV板測得A370測定管=0.344,A370對照管=0.145,按液體體積計算酶活得:
蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mL)=(A370測定管-A370對照管)÷10.56=0.0188 μmol/mL。
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