土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）活性檢測(cè)試劑盒說明書

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號(hào)：BC2995

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周。臨用前根據(jù)用量用蒸餾水稀釋100倍，現(xiàn)用現(xiàn)配；

2、 試劑二：臨用前加15mL蒸餾水備用，2-8℃保存2周；

3、 試劑三：臨用前加15mL蒸餾水溶解，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可。用不完的試劑2-8℃保存2周；

4、 標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL 亞*標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的關(guān)鍵酶之一，它是由土壤反硝化細(xì)菌產(chǎn)生的一種還原酶類，可將NO₂^-還原為NO，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù)。

亞硝酸還原酶可將NO₂^-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO₂^-減少，即540nm處吸光值的變化可反應(yīng)土壤中亞硝酸還原酶的活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目篩、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱烘干，過30-50目篩。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、 樣本測(cè)定：

三、S-NiR計(jì)算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。

2. S-NiR的計(jì)算：

酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。

S-NiR（U/g 土樣）=x×V反應(yīng)÷W÷T=2.4×x÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d；V反應(yīng)：反應(yīng)體系體積，0.3mL；W：土樣質(zhì)量，g。

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