乙醇酸氧化酶（GO）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
紫外分光光度法
貨號(hào)：BC2010
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入6 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說(shuō)明：
乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循環(huán)中的一種酶，也是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通過(guò)測(cè)定乙醇酸氧化酶活性，可以了解植物光合和呼吸代謝的基本方法。
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和*反應(yīng)生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值A(chǔ)1>1，請(qǐng)將樣本用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 色素含量較高的樣本，可在提取酶時(shí)加活性炭吸附。

3. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，其OD值變化不超過(guò)0.02。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱(chēng)取約0.1g三葉草組織，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.868-0.773=0.095，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.027-0.013=0.014，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.095-0.014=0.081，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

GO酶活（U/g 質(zhì)量）=392.16×ΔA÷W=317.6496 U/g 質(zhì)量。

1. 稱(chēng)取約0.1g菠菜組織，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心10min，取上清稀釋2倍進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.873-0.778=0.095，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.027-0.013=0.014，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.095-0.014=0.081，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

GO酶活（U/g 質(zhì)量）=392.16×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=635.2992 U/g 質(zhì)量。
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