氧化型谷*甘肽含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1180
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：有毒易揮發(fā)試劑，涉及該試劑的步驟建議在通風櫥內(nèi)操作。

2. 試劑五：臨用前加入8 mL蒸餾水，溶解后-20℃分裝可保存4周，避免反復凍融。

3. 試劑六工作液：先將試劑六內(nèi)液體離心至底部再用移液槍吹打混勻使用。臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑六：蒸餾水=1μL：20μL（21μL，約2T）的比例配制備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 標準品：10mg氧化型谷*甘肽。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，濃度為10 mg/mL，2-8℃可保存4周。

產(chǎn)品說明：
氧化型谷*甘肽是谷*甘肽（GSH）的氧化形式，又稱為二硫代谷*甘肽，是兩分子的谷*甘肽氧化而成。*會被谷*甘肽還原酶還原成GSH，因此機體中大多數(shù)是以還原型形式存在。測定細胞內(nèi)GSH和*含量以及GSH/*比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷*甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（2-*甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應產(chǎn)生2-硝基-5-*甲酸，2-硝基-5-*甲酸在波長412nm處具有最大光吸收的特點，通過2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型谷*甘肽，然后利用谷*甘肽還原酶將*還原為GSH，借此測定氧化型谷*甘肽的含量。
技術指標：
低檢出限：1.369 μg/mL
線性范圍：1.5625-50 μg/mL
意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、分析天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、1mL玻璃比色皿、勻漿器/研缽/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 若不確定樣本中*含量的高低，可稀釋幾個梯度后再進行測量。

2. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

3. 因為試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量，需另取組織。

相關發(fā)表文獻：

1. Hua Li,Lanying Wang,Yanping Luo. Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan. Molecules. October 2018;(IF3.06)

2. Chen Z Y, Wang Y T, Pan X B, et al. Amelioration of cold-induced oxidative stress by exogenous 24-epibrassinolide treatment in grapevine seedlings:Toward regulating the ascorbate–glutathione cycle[J].Scientia horticulturae,2019,244:379-387.

參考文獻：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.

2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

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