考馬斯亮藍法測蛋白含量測定

貨號：YW2
規(guī)格：50T/48

產品簡介 ：
    樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
    在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；該復合物在 595nm 處有大吸收峰，其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)

    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質的四級結構。SDS還與蛋白質結合使蛋白質－SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時各種蛋白質分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質本身電荷及結構上的差異，電泳速度只是與蛋白質分子量有關。用本法測定蛋白質的分子量只需根據(jù)待測蛋白質在已知分子量的標準蛋白質圖中的位置，就能得知分子量。

試驗中所需的儀器和試劑：
     酶標儀、酶標板、移液器和蒸餾水。

產品內容 ：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標準品：液體×1 瓶，4℃保存。

操作步驟 ：
一 、 樣品中可溶性蛋白質提取 ：
    液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
    組織樣品：準確稱取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（ 自備，根據(jù)需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水） ，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測液。 （動物樣品常常需要稀釋）
二 、 吸光值測定 ：
    1. 分光光度計儀預熱 30 min 以上，調節(jié)波長到 595nm，蒸餾水調零。
    2.  空白 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  蒸餾水， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 空白管。
    3.  標準 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  標準液， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 標準管。
    4.  測定 管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200µL  待測液，1000µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于595nm 測定吸光度，10~20min 內完成測定，記為 A 測定管。
蛋白質含量 計 算 ：
   C 待測（µg/m L）= C 標準管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)=50×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)
   C 標準管：標準品蛋白質濃度，50µg/mL。

注意事項 ：
    1．加考馬斯亮藍后，在 10~20min 內吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在 10~20min 完成比色。
    2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用 95%乙醇沖洗。
    3．測定前用 1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋。

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定訂購說明：

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。