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品牌	SOLARBIO/索萊寶	CAS	詳詢
分子式	詳詢	純度	詳詢
分子量	詳詢	貨號	BC1100
規(guī)格	50管/24樣	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	輔酶ⅡNADP(H)含量檢測	應(yīng)用領(lǐng)域	環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合

輔酶II NADP(H)含量檢測試劑盒（MTT顯色法）說明書
可見分光光度法
貨號：BC1100
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
酸性提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
堿性提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1支	-20℃保存
試劑三	液體12mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四A	粉劑×1支	-20℃保存
試劑四B	液體5mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑六	液體70 mL×1瓶	2-8℃保存
NADP標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	-20℃保存
NADPH標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	-20℃保存

溶液的配制：

試劑二：臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻，溶解后2-8℃保存4周。
試劑四：臨用前將試劑四A溶解到試劑四B中，溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融，-20℃保存4周。
NADP標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.27 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
NADPH標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.2 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。

產(chǎn)品說明：
輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NADP⁺和 NADPH 含量測定可以計算 NADP（NADPH + NADP⁺)含量和 NADPH/NADP⁺比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP⁺比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP⁺和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測吸光值，從而測定 NADPH 含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP⁺為NADPH，從而檢測NADP⁺含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

如果一次性測定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
反應(yīng)過程中注意避光。
由于每一個測定管需要設(shè)一個對照管，本試劑盒50管可以測定24個NADP⁺或NADPH。

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

實驗實例：

NADP⁺的測定：稱取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定= A₂- A₁=0.092-0.036=0.056，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.055，NADP⁺含量得：NADP⁺ (nmol/g 質(zhì)量）= x₁÷W=0.55 nmol/g 質(zhì)量。

NADPH的測定：稱取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A₂’- A₁’=0.046-0.012=0.034，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.061，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x₂÷W=0.614 nmol/g 質(zhì)量。

NADP⁺的測定：稱取 0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定= A₂- A₁=0.217-0.108=0.109，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.155，NADP⁺含量得：NADP⁺ (nmol/g 質(zhì)量）= x₁÷W=1.55 nmol/g 質(zhì)量。

NADPH的測定：稱取0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A₂’- A₁’=0.085-0.008=0.077，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.191，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x₂÷W=1.91 nmol/g 質(zhì)量。

NADP⁺的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定= A₂- A₁=0.055-0.026=0.029，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.005，NADP⁺含量得：NADP⁺ （nmol/mL）= 11 x₁=0.050 nmol/mL。

NADPH的測定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測定步驟操作，玻璃比色皿測得吸光值后計算 ΔA 測定=A測定-A對照= A₂’- A₁’=0.028-0.012=0.016，標(biāo)準(zhǔn)曲線y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.007，NADPH含量得：NADPH（nmol/mL）=11 x₂=0.080 nmol/mL。
標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋表
NADP⁺標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表 NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

序號	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）	序號	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）
1	5000	10	990	50	1	5000	10	990	50
2	50	100	900	5	2	50	100	900	5
3	5	200	600	1.25	3	5	200	200	2.5
4	1.25	200	200	0.625	4	2.5	200	200	1.25
5	0.625	200	200	0.3125	5	1.25	200	200	0.625
6	0.3125	200	200	0.15625	6	0.625	200	200	0.3125
7	0.15625	200	200	0.078	7	0.3125	200	200	0.15625
8	0.078	200	200	0.039	8	0.15625	200	200	0.078
9	0.039	200	200	0.0195	9	0	200	200	0
10	0.0195	200	200	0.01
11	0	0	200	0

輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒

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