線粒體呼吸鏈系列試劑盒 AMP含量試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
    AMP 廣泛存在于動(dòng)物、 植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中， 是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。 測(cè)定 AMP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。
    AMP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色譜法測(cè)定其含量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
    高效液相色譜儀、低速離心機(jī)、溶劑抽濾裝置、針頭式過濾器（水系，50 個(gè)，0.22µm） 、濾膜（水系和有機(jī)系各 1 個(gè)，0.45µm） 、C18 柱（4.6 ×150 mm） 、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個(gè)，2mL） 、甲醇（色譜級(jí)，300 mL） 、甲醇（色譜級(jí)，300 mL） 、蒸餾水

產(chǎn)品內(nèi)容 ：
     試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
     試劑二：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
     試劑三： 粉劑 1×1 瓶， 粉劑 2×1 瓶， 4℃保存； 臨用前用少量蒸餾水將粉劑 1 和粉劑 2 溶解后倒入 1000mL容量瓶中，用蒸餾水定容 1000mL，形成流動(dòng)相緩沖液基質(zhì)（注：試劑瓶中的粉劑要沖洗干凈）, 4℃可保存 1 周；
     試劑四： AMP 標(biāo)準(zhǔn)品 5mg×1 支， -20℃保存。 臨用前加入 1mL 雙蒸水， 配成 5mg/mL 溶液， 配好后-20℃可保存 1 周；

操作步驟 ：
一 、 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作 ：
     1、將雙蒸水 1000 mL、流動(dòng)相緩沖液基質(zhì) 1000 mL 和甲醇 300 mL 用 0.45 µm 的濾膜抽濾，以除去溶劑中的雜質(zhì)，防止堵塞色譜柱。（注：雙蒸水和緩沖液基質(zhì)用水系濾膜抽濾，甲醇用有機(jī)系濾膜抽濾）。
     2、 流動(dòng)相的配制： 將抽濾完畢的流動(dòng)相緩沖液基質(zhì) 1000 mL 與甲醇配比為 99.9： 0.1 （v/v） ， 即取 999mL緩沖液基質(zhì)與 1mL 甲醇混合。
     3、將抽濾完畢的甲醇和雙蒸水配比成 100%的甲醇， 10%的甲醇，雙蒸水各 250 mL。 將 2 和 3 中的溶劑超聲 30 分鐘，以脫去溶劑中的氣泡，防止堵塞色譜柱。

二 、AMP  的提取 ：
     1、組織的處理：準(zhǔn)確稱取組織重量 0.1g，加入 1mL 試劑一，提取 AMP， 4000 g 常溫離心 15 min，取上清液，加入等體積的試劑二，混勻，4000 g 常溫離心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔濾膜過濾后冰上放置，待測(cè)。

     2、 細(xì)胞處理： 收集約 30 mL 細(xì)胞， 離心菌體經(jīng)干燥后， 加入 1 mL 試劑一， 超聲破壁細(xì)胞(950 W， 30%，15 min，工作 1 s 間隔 2 s)，4000 g 常溫離心 15 min，取上清液，加入等體積的試劑二，混勻，4000 g 常溫離心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔濾膜過濾后冰上放置，待測(cè)。

三 、AMP  含量測(cè)定操作步驟 ：
     1. 開啟電腦、檢測(cè)器和泵，安裝上色譜柱，打開 empower 軟件，在方法組中設(shè)置進(jìn)樣量 20 µL，流速 1mL/min，保留時(shí)間 10min，檢測(cè)波長(zhǎng) 254nm,設(shè)置完畢保存方法組。
     2. 用 100%的甲醇、10%的甲醇、雙蒸水按甲醇濃度從大到小的順序洗色譜柱 30min。
     3. 用流動(dòng)相洗柱子，待基線穩(wěn)定后開始加樣。
     4. 加入標(biāo)準(zhǔn)品 20 µL，在 10min 內(nèi)可分離 AMP，AMP 的保留時(shí)間在 7min 左右（柱子不同，保留時(shí)間有差異），計(jì)算不同濃度的 AMP 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積。
     5. 加入樣品 20 µL，在相應(yīng)保留時(shí)間處檢測(cè) AMP 的峰面積。
        AMP  含量的計(jì)算 ：將 5mg/ml 的 AMP 標(biāo)準(zhǔn)品用雙蒸水分別稀釋成 100 µg/ml、80 µg/ml、60 µg /ml、40 µg /ml 和 20 µg /ml的 AMP 標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（µg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)分別計(jì)算 AMP 標(biāo)準(zhǔn)曲線。
        注：標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)要根據(jù)樣品中 AMP 濃度確定，樣品中 AMP 的峰面積必須落在不同濃度的 AMP 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積之內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)品稀釋倍數(shù)只是一個(gè)參考。

線粒體呼吸鏈系列試劑盒 AMP含量試劑盒訂購(gòu)說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。