基因組提取試劑盒 質(zhì)粒提取試劑盒
貨號：D6942
規(guī)格：100T

產(chǎn)品說明：
    質(zhì)粒(Plasmid)是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，它具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。

質(zhì)粒提取原理及流程：
    較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒(<15kb)。去污劑裂解法則比較溫和，一般用于分離大質(zhì)粒(>15kb)。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒DNA為共價閉合環(huán)狀分子；當(dāng)用堿處理DNA溶液時，線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，共價閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在回到中性即恢復(fù)其天然構(gòu)象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，離心去除沉淀后，就可從上清中回收質(zhì)粒DNA。目前，市面上質(zhì)粒提取試劑盒大多數(shù)都是采取上述的堿裂解方法，不同之處在于純化方式。目前比較常用的純化系統(tǒng)是硅基質(zhì)吸附材料，其原理為在高鹽環(huán)境下質(zhì)粒DNA能夠結(jié)合到硅基質(zhì)上，然后用低鹽緩沖液或水將質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)上洗脫下來。得到的質(zhì)?？梢杂糜诿盖?、PCR、測序、細(xì)菌轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實驗。

質(zhì)粒鑒定與評價：
瓊脂糖電泳檢測
    堿裂解法提取的質(zhì)粒經(jīng)瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定時，理想狀況是只出現(xiàn)超螺旋—條帶，但在質(zhì)粒提取過程中，由于機(jī)械力、酸堿度、試劑等原因，使質(zhì)粒DNA鏈發(fā)生斷裂，可能出現(xiàn)兩條帶或者出現(xiàn)三條帶，這三條帶電泳遷移率從快到慢，分別是超螺旋、開環(huán)和復(fù)制中間體(即沒有復(fù)制*的兩個質(zhì)粒粘連在—起)。如果加溶液Ⅱ后過度振蕩，會在遠(yuǎn)離這三條帶的位置出現(xiàn)條帶，這條帶泳動得較慢，是大腸桿菌基因組DNA的片斷。非常偶然的是，有時候提取的質(zhì)粒會出現(xiàn)4個以上的條帶，這是由于特殊的DNA序列導(dǎo)致了不同程度的超螺旋(超螺旋的圈數(shù)不同)所致。但是，只要質(zhì)粒經(jīng)單酶切鑒定后，只有單一條帶，就證明沒有基因組的污染。酶切檢測質(zhì)粒提取后，為了進(jìn)—步鑒定質(zhì)粒的正確與否，就要進(jìn)行酶切鑒定，通過與Marker對比，確定質(zhì)粒的分子量大小。用紫外線分光光度計檢測濃度測定標(biāo)準(zhǔn)為：OD 260 值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。OD 260 /OD 280 比值1.7-1.9之間說明所得DNA純度較好。OD 260 /OD 280 比值若低于1.7說明可能有蛋白污染。OD 260 /OD 280 比值若高于2.0則說明DNA有可能已降解。如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子濃度會影響光吸收值，但并不表示純度低。

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