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藍(lán)白斑篩選中IPTG和X-gal的工作原理

發(fā)布日期: 2016-07-29
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細(xì)菌藍(lán)白斑篩選原理:IPTG為安慰型誘導(dǎo)物,可誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深藍(lán)色的物質(zhì):5-溴-4-靛藍(lán),有色物質(zhì)可使所在的菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。但當(dāng)含有l(wèi)ac啟動子的質(zhì)粒中插入了外源基因,則不能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色底物,所在的菌落呈現(xiàn)白色(相對藍(lán)色),這樣的菌落才有可能是我們想要的菌株。藍(lán)白斑篩選減輕了在篩選陽性克隆菌落時的工作量。

使用濃度:IPTG濃度:50mg/ml;X-gal濃度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培養(yǎng)基上,同時滴加50~100l無菌水或無菌LB,用涂布棒涂抹均勻,放表面無水后即可使用。

預(yù)制板:倒板時,在溫度降50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混勻后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal對光敏感,含有X-gal的平板應(yīng)該避光保存,在1~2周內(nèi)使用;

3、培養(yǎng)后藍(lán)白斑顯示不明顯可將平板放入4℃冰箱中,一段時間后藍(lán)白斑顯示會比較明顯,便于挑選。

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