瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料美藍(lán)組成的復(fù)合染料,溶于甲醇 ,后解離為帶正電的美藍(lán)和帶負(fù)電的伊紅離子。瑞氏染色法就是用瑞氏染色液對細(xì)菌進(jìn)行染色。那么瑞氏染色原理是什么?
瑞氏染色原理:
瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)( Methvlem blue )和酸性染料黃色伊紅( Eostm Y )合稱伊紅美藍(lán) 染料即瑞氏 (美藍(lán)-伊紅Y)染料。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子,無色部分為陽離子,其有色部分為酸性,故稱伊紅為酸性染料。美藍(lán)通常為氯鹽是堿性的,美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽,其有色部分為陽離子,無色部分為陰離子,恰與伊紅鈉鹽相反。
為了觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),識別各種細(xì)胞及其異常變化,血涂片必須進(jìn)行染色。瑞氏染色法是血細(xì)胞分析經(jīng)典和常用的染色法。 細(xì)胞的各大種成分均由蛋白質(zhì)構(gòu)成,由于蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),所帶正電荷的數(shù)量隨溶液pH而定。對某一蛋白質(zhì)而言,如環(huán)境pH<pI,(pI為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)),則該蛋白質(zhì)在酸性環(huán)境中正電荷增多,易與伊紅結(jié)合,染色偏紅;相反,當(dāng)環(huán)境的pH>pI,即在堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)結(jié)合,染色偏藍(lán)。臨床上常用緩沖液(pH6.4~6.8)來調(diào)節(jié)染色時(shí)的pH值,同時(shí)還應(yīng)注意使用清潔、中性的玻片,的甲醇配制染液,以期達(dá)到滿意的染色效果。
瑞氏染色的染料配方濃度對細(xì)胞核著色程度適中,細(xì)胞核結(jié)構(gòu)和色澤清晰艷麗,對核結(jié)構(gòu)的識別較佳,但對胞漿著色偏酸,色澤偏紅,對細(xì)胞漿內(nèi)顆粒特別是嗜天青顆粒及嗜中性顆粒著色較差。
瑞氏染液染色鑒定
瑞氏或姬姆薩染色液鑒定:剛配好或放置一個(gè)月以上的染液可進(jìn)行下列鑒定:
1.取1滴染液于乳白玻板上,自行迅速擴(kuò)散開,其顏色變紫紅色,且有偽足形成。
2.取1滴染液加1滴緩沖液,染液由深藍(lán)色立即變?yōu)樽霞t色。
3.取血片或骨髓片進(jìn)行試染檢查,觀察染色后各類細(xì)胞的胞核、胞漿及顆粒著色情況,pH是否合適及染色合適時(shí)間。如有上述變化,表明染液合格,可供使用。
以上為瑞氏染色原理,瑞氏染色是目前常用而又簡單的染色方法。瑞氏試劑中之酸性伊紅和堿性美藍(lán)混合經(jīng)化學(xué)作用后,變成中性之 伊紅化美藍(lán),久置后,經(jīng)氧化而含有天青。此三種染料分別和細(xì)胞核及漿中的NH3+和COO-等結(jié)合,使細(xì)胞核及胞漿著色。由于系中性染料,又有緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度,所以細(xì)胞受染后,藍(lán)紅等顏色都較適中,核染質(zhì)、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚