日韩午夜福利片段在线观看-成人国产精品户外在线野战-人妻人人澡人人添人人爽尤物-色吊丝中文在线免费看

歡迎光臨北京索萊寶科技有限公司網(wǎng)站!
銷售咨詢熱線:
17801761073
產(chǎn)品目錄
您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

細(xì)胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

發(fā)布日期: 2015-05-14
瀏覽人氣: 1103

細(xì)胞凋亡發(fā)生時,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),可通過檢測核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。


() 原理

細(xì)胞凋亡的發(fā)生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測細(xì)胞溶解物中的核小體片段。


()材料與試劑

1.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒,生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗

體。

2.過氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體

3.鏈霉親合素包被的微孔板

4.DNA-組蛋白復(fù)合物,作為陰性對照。

5.ABTS底物

6.溶解緩沖液

7.溫育緩沖液

8.底物緩沖液


()樣品

1.培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞的裂解物細(xì)胞裂解步驟:收集細(xì)胞,離心后,用200μl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。

2.培養(yǎng)細(xì)胞的上清液

3.血漿(血清)


()操作方法

1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20μl上清液,加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。

2.另加入80μl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液(1118混合),室溫下孵育2h(置搖床上,250r/min)

3.取上清,用300μl溫育緩沖液洗滌3次,小心移去洗滌液。

4.加入100μl底物緩沖液,室溫下孵育使顏色變化適合(置搖床上)。

5.盡快作比色分析(10min20min內(nèi)),用底物緩沖液作空白對照,以波長405nm,參考波長492nm進(jìn)行檢測。


()結(jié)果判定

按下列公式計算細(xì)胞釋放的單/低聚核小體片段的特別聚集值:

注:mU=吸收值(10-3)=雙孔吸收值的平均OD-底物OD值,若樣品的吸收值超過比色測定范圍,應(yīng)適當(dāng)稀釋后再檢測。


分享到:
色婷婷日本视频在线观看| 日韩欧美91在线视频| 久久精品国产在热久久| 亚洲午夜福利不卡片在线| 欧美中文字幕日韩精品| 五月天丁香亚洲综合网| 日韩欧美国产三级在线观看| 国产视频在线一区二区| a久久天堂国产毛片精品| 精品国产丝袜一区二区| 99久久精品视频一区二区| 中文字幕日韩欧美亚洲午夜| 日韩一级毛一欧美一级乱| 91精品国产综合久久不卡| 亚洲人妻av中文字幕| 国产日韩综合一区在线观看| 夫妻激情视频一区二区三区| 夫妻性生活真人动作视频| 日本午夜免费观看视频| 欧美一区二区三区十区| 国产不卡一区二区四区| 日本加勒比在线播放一区| 日韩精品福利在线观看| 日本亚洲精品在线观看| 熟女乱一区二区三区四区| 成人精品欧美一级乱黄| 国产精品午夜一区二区三区| 久久精品偷拍视频观看| 日韩中文字幕人妻精品| 太香蕉久久国产精品视频| 色好吊视频这里只有精| 天海翼精品久久中文字幕| 国产三级不卡在线观看视频| 麻豆一区二区三区精品视频| 一区二区在线激情视频| 亚洲香艳网久久五月婷婷| 日本黄色录像韩国黄色录像| 国产成人午夜福利片片| 午夜福利网午夜福利网| 老司机精品线观看86| 日韩精品一级片免费看|