隨著科學技術(shù)的發(fā)展和生活水平的不斷提高對生物醫(yī)藥產(chǎn)品的質(zhì)量要求也越來越高,所以對制備工藝中所涉及到的各種原材料的質(zhì)量標準要求也越來越高,特別是對用于細胞培養(yǎng)基中的主要天然成份――牛血清的質(zhì)量要求也不斷提高。牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。
對牛血清的質(zhì)量要求:Gibco 和二家主要的美國牛血清供應(yīng)商的牛血清都已進入到我國市場,他們對其質(zhì)量標準要求都極為嚴格,從血清來源到產(chǎn)品質(zhì)量都有明確規(guī)定。
1) 血清來源:可從世界各國收集胎牛血清,但是必須符合他的質(zhì)量標準和美國農(nóng)業(yè)部進口要求。地方當局還不清楚本地是否有牛海綿狀病毒流行的血清不收集,有說明血清質(zhì)量的證明資料:包括收集過程的全部資料、檢驗結(jié)果和交付情況。
2)血清的收集:胎牛血清是心臟穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10個月內(nèi))血清靜脈取血。血清采集條件必須符合工業(yè)生產(chǎn)的標準:低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存。符合要求的血清56℃水浴30分鐘滅活。
3)血清的制備:
a. 超低IgG胎牛血清:通過親和層析工藝去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBS γ球蛋白含量減到低,一般IgG≤5ug/ml,生物學活性不變。
b. 血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/過氧化酶方法測定)。
c. γ-射線照射:已經(jīng)證明γ-射線照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。照射劑量為30~45KG。而且這個劑量的γ-射線照射不會改變血清的理化性質(zhì)和對細胞培養(yǎng)的影響。
4)除菌過濾:經(jīng)過上述處理的粗制血清再經(jīng)過一系列除菌濾膜過濾包括0.2微米(micron)和0.1微米濾膜。FBS要通過三層0.1微米濾膜,其他血清可通過0.2微米濾膜。