細(xì)胞來源是關(guān)鍵
支原體污染的常見原因之一是引入的培養(yǎng)物已經(jīng)被感染。一旦進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,這些小東西會蔓延到每個角落,讓你崩潰。要避免這種情況,簡單的辦法就是不從其他實(shí)驗(yàn)室要細(xì)胞,而從供應(yīng)商或菌種保藏中心(ATCC或ECACC)購買,這些細(xì)胞經(jīng)過嚴(yán)格檢測,確保不含有支原體。
如果購買有難度,或基于其他原因,不得不使用其他實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞,那么也要保持警惕,在單獨(dú)的培養(yǎng)箱中隔離,同時進(jìn)行支原體的檢測。市場上有多家公司提供支原體檢測試劑盒,你可自行選擇。
定期檢測很重要
即使實(shí)驗(yàn)室沒有新來的細(xì)胞,支原體也可能通過操作人員傳遞到現(xiàn)有的培養(yǎng)物。當(dāng)然,操作人員并不知道。支原體污染的另一條路線是通過你的細(xì)胞培養(yǎng)試劑。培養(yǎng)基、酶這些常用試劑,也有可能被支原體污染。
盡管無法*避免人或試劑的污染,但常規(guī)檢測也能避免情況惡化。也許,當(dāng)支原體初次感染時,我們未必能檢測到,但盡早發(fā)現(xiàn),就能防止這種微生物的傳播,避免大的損失。
支原體檢測有很多種。直接培養(yǎng)方法雖然準(zhǔn)確率高,但需要三到四周的時間。因此,我們在常規(guī)檢測中使用間接檢測方法已足夠,若發(fā)現(xiàn)陽性,則后續(xù)可采用較為繁瑣的直接檢測。常見的間接檢測方法有基于酶活性的熒光和生化分析、PCR分析、免疫分析等。
無菌操作要做好
支原體污染的另一個主要源頭是無菌操作不佳。盡管良好的操作可能是簡單的預(yù)防措施,但說起來容易,做起來難。每個人都會犯錯,特別是在重復(fù)勞動時。因此,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)不定期開展培訓(xùn)和監(jiān)督,以便讓每個人都充分認(rèn)識到支原體的破壞性。
許多實(shí)驗(yàn)室目前仍使用抗生素,但細(xì)胞培養(yǎng)人員逐漸認(rèn)識到這是不負(fù)責(zé)任的,因?yàn)樗鼛砹四退幬⑸锏膯栴}。相反,好依賴自身的無菌操作來預(yù)防支原體,而只有在懷疑或確認(rèn)感染的時候才使用抗生素。
保藏細(xì)胞防萬一
后,通過低溫保藏儲備一些細(xì)胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結(jié)果,那么可靠的補(bǔ)救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始。當(dāng)然,你得確保儲備的細(xì)胞是不含支原體的.