分子診斷是以核酸作為檢測對象,主要應用于臨床實驗室各類疾病的診斷中,如腫瘤、感染、遺傳等,而
核酸提取是分子診斷實驗的“開始”。
幾乎所有實驗均是以核酸提取為基礎,無論后續(xù)的克隆、PCR、qPCR、建庫、測序等都需要核酸提取以后才能順利進行。核酸提取純化質量是保證核酸檢測數據準確性的前提,也是分子診斷行業(yè)發(fā)展的前提。
核酸提取又叫核酸提取純化,簡單點就是裂解+純化。裂解就是通過溫度以及試劑將樣本中的核酸游離在裂解液體系的過程。純化就是使核酸與裂解體系中的其他雜質成分比如蛋白質,鹽等徹底分離的過程。
核酸的檢測方法:檢測核酸質量的方法有很多,實驗室常見的方法就是凝膠電泳、紫外分光光度計、PCR擴增。
PCR與電泳到底誰強?
眾所周知,土壤核酸提取很容易失敗,原因在于土壤通常是富含腐殖酸以及腐殖酸類似物。核酸提取的過程中,如果雜質去除的不干凈就會直接影響下游的PCR實驗。
曾有人說,你看我土壤提取的濃度多高,但是一做PCR擴增就發(fā)現電泳一片“漆黑”,新手總是百思不得其解。
其實很容易理解,因為核酸提取后的電泳圖只能輔助我們判斷提取的核酸的濃度,并不能成為檢測核酸質量的標準。要想判斷核酸提取的成功,做PCR擴增是直接、簡單的方式。