草酸銨結(jié)晶紫染色液是一種堿性染料,細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液??梢院图?xì)胞核中的DNA結(jié)合,從而將細(xì)胞核染成紫色。它在細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)和細(xì)菌學(xué)等方面都有極廣泛的應(yīng)用。
草酸銨結(jié)晶紫染色液的使用方法:
1、準(zhǔn)備好含有待測蛋白的固相膜:包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。
2、加入適量的DAB顯色液,鋪滿整個(gè)固相膜表面(可按比例增減)。
3、置于平式搖蕩儀上,在室溫下孵育2至5分鐘,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出現(xiàn)。
4、用鑷子夾起固相膜,放進(jìn)無離子水里清洗。
5、空氣中晾干。
6、拍照記錄。
草酸銨結(jié)晶紫染色液的注意事項(xiàng):
1、染色液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出,應(yīng)確保結(jié)晶*溶解再行使用;
2、顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配,新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色,如顏色過深,請勿使用;
3、DAB在常溫下不穩(wěn)定,每次取用后均應(yīng)及時(shí)加蓋密封放回冰箱,以免因草酸銨分解影響實(shí)驗(yàn),或因滲漏造成實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染;
4、草酸銨有潛在致突變作用,操作時(shí)應(yīng)注意穿戴好防護(hù)用具。
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